培養(yǎng)原代細(xì)胞時(shí)哪些問(wèn)題需要注意

1.原代細(xì)胞用1640加10%胎牛血清，有的種系用DMEM.血清要求質(zhì)量較高，在普通血清中細(xì)胞生長(zhǎng)不太好。1640用雙蒸水溶解，按說(shuō)明加入碳酸氫鈉。

2.培養(yǎng)液中應(yīng)加入HEPES，起緩沖pH值的作用，否則會(huì)影響細(xì)胞狀態(tài)。如果用20%的HEPES，每次配培養(yǎng)液時(shí)每200ml培養(yǎng)液可加入5ml.加入HEPES后1640培養(yǎng)液顏色略呈橘黃色而非暗紅色。

3.消化所用胰酶可選擇0.125%濃度，且不要消化時(shí)間太長(zhǎng)。也有研究者認(rèn)為不用胰酶，直接吹打使細(xì)胞脫壁，但使用胰酶效果較好。消化時(shí)在鏡下觀察到原代細(xì)胞形態(tài)稍有變化即可，不要等形態(tài)明顯變化后再停止。可以不用加血清終止消化，只要將胰酶倒出來(lái)，加上培養(yǎng)液吹打即可。

4.傳代密度不宜過(guò)高也不易過(guò)低，一般1瓶傳3瓶可能比較合適。

5.培養(yǎng)液應(yīng)該適當(dāng)偏酸性，在7.0-7.2之間比較好。一般加上HEPES后，pH值是不用調(diào)的。

6.細(xì)胞代數(shù)越高生長(zhǎng)越快，同時(shí)性狀和原代差別也更大。一般2-3天傳代一次比較合適。

7.傳代時(shí)原代細(xì)胞密度在80%左右比較好，如果超過(guò)90%融合再傳會(huì)影響細(xì)胞狀態(tài)。