細胞株的傳代培養方法：

1、材料準備及實驗步驟
儀器：CO2培養箱、倒置顯微鏡、安全柜
材料：Corning細胞培養瓶、試管、移液管、巴士德吸管、廢液缸、75%酒精棉球、酒精燈、培養的細胞。
試劑：培養基RPMI1640(Corning10-040-CVR)、胎牛血清、0.25%胰蛋白酶、Hanks液(Corning 21-020-CVR)。
實驗步驟：
① 入無菌室之前用肥皂洗手，再用75% 的酒精擦拭消毒雙手;
② 倒置顯微鏡下觀察細胞形態，確定細胞是否傳代及細胞需要稀釋的倍數。 將培養用液37℃下預熱。
③ 超凈臺臺面應整潔，用75%酒精棉球擦拭清潔;
④ 打開超凈工作臺的紫外燈照射臺面20min左右，關閉紫外燈，打開風機清潔空氣除去臭氧;
⑤ 點燃酒精燈;取出無菌試管，巴士德吸管和刻度吸管;安上橡皮頭;過酒精燈火焰略燒后插在無菌試管內。
⑥ 將培養用液瓶口用75%酒精消毒，過酒精燈火焰后斜置于酒精燈旁的架子上。
⑦ 倒掉培養細胞的舊培養基。酌情可用2-3ml Hanks液洗去殘留的就培養基，或用少量胰酶涮洗一下。
⑧ 每個大培養瓶加入1ml胰酶，小培養瓶用量酌減，蓋好瓶蓋后在倒置顯微鏡下觀察。當細胞收回突起變圓時立即翻轉培養瓶，使細胞脫離胰酶，然后將胰酶倒掉。注意勿使細胞提早脫落入消化液中。
⑨ 加入少量的含血清的新鮮培養基，反復吹打消化好的細胞使其脫壁并分散，再根據分傳瓶數補加一定量的含血清的新鮮培養基(7-10ml/大瓶;3-5ml/小瓶)制成細胞懸液，然后分裝到新培養瓶中。蓋好瓶蓋，適度擰緊后稍回轉，以利于CO2的進入，將培養瓶放回CO2培養箱。
⑩ 對懸浮培養細胞，步驟7-9不做。直接將細胞懸液進行離心去除舊培養基上清，加入新鮮培養基，然后分裝到各瓶中。
2、注意事項
① 傳代培養時注意無菌操作并防止細胞間的交叉污染。所有操作盡量靠近酒精燈火焰。每次只進行一種細胞的操作。每種細胞使用一套器材。
② 每天觀察細胞形態，掌握好細胞是否健康的標準：健康細胞的形態飽滿，折光性好，生長致密時即可傳代。
③ 如發現細胞有污染跡象，應立即采取措施，一般應棄置污染的細胞，如果必須挽救，可加含有抗生素的BBS或培養基反復清洗，隨后培養基中加入較大量的抗生素，并經常更換培養基。
3、傳代細胞的建系和維持
細胞系的維持通過換液傳代再換液、再傳代和細胞種子凍存來實現。
對每一個細胞株來說都有其自身的特點，要做好建系的維持必須記錄好細胞檔案,換液傳代和做好細胞系(或株)的鑒定和管理工作。
BR    Bile powder of pig    100克    豬膽汁粉
BR    OX Bile dihydrate purified    250克    脫氫牛膽粉
BR    Beef extract powder    250克    小牛浸膏粉
BR    Yeast extract powder    250克    酵母粉
        500克    
BR    Yeast extract    500克    酵母浸膏
BR，90%    Bile salt No. 3    25克    3號膽鹽
BR，70%    Bile salt No. 5    25克    5號膽鹽
BR    Bile salt No.7    25克    7號膽鹽
BR    Bile salt from sheep    25克    羊膽鹽
BR，60%    Bile salt from ox    25克    牛膽鹽
細胞株