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更新時間:2017-09-27
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腫瘤細胞的分離和純化:
1.取2~3公斤重的家兔,耳緣靜脈注射10ml空氣處死動物或注射2ml(含130mg)戊巴比妥麻醉動物。仰臥固定,剪開胸壁。以下過程注意無菌操作。小心從環狀軟骨下方剪下氣管,分離心臟和血管,取出肺,剪去脂肪和結締組織。用無菌紗布小心擦凈肺表面,稱重。
2.分離肺泡巨噬細胞:用夾子夾住氣管,使肺懸空。向氣管中注射40ml無菌的冷生理鹽水,讓生理鹽水進入全部肺泡。用鑷子提起氣管,從夾子下面剪斷氣管,將肺中的液體倒入離心管中。再用同樣方法,用40ml無菌冷生理鹽水沖洗肺泡,合并浸出液,置4℃。
3.分離肺組織中的巨噬細胞:取出肺泡巨噬細胞后,剪去氣管,將肺組織放在有冷RPMI-1640培養液的平皿中。平皿置冰上,用吸滿冷RPMI-1640培養液的20ml注射器接23號針頭,一邊灌注一邊用針頭梳離肺組織,直到肺組織與支氣管樹全部分離。使肺組織通過200目的鋼絲網,分離單個細胞。
4.以下過程均在4℃中進行。分別處理肺泡巨噬細胞和肺組織中的巨噬細胞:離心200×g 10分鐘,去上清液。輕彈試管,懸浮細胞,加入10ml低滲液(20mmol/L Tris, 0.75%氯化銨,pH7.4),37℃處理3~5分鐘,溶解紅細胞。紅細胞通常分別占肺泡巨噬細胞和組織巨噬細胞的1%和10%。也可以不用低滲處理,直接在淋巴細胞分離液上分離腫瘤細胞。
5.離心200×g 10分鐘,去上清液。用RPMI-1640培養液洗滌細胞一次。將細胞懸液加在淋巴細胞分離液(比重1.077)上,離心400×g 20分鐘,收集交界面的巨噬細胞。棄去沉淀的死細胞和紅細胞。
6.用RPMI-1640培養液洗滌巨噬細胞2次。臺盼藍染色檢測細胞活力和細胞數,將細胞配成所需濃度。此時巨噬細胞活力可達90%以上,巨噬細胞占全部細胞的90%以上。
含量: 進口/國產 蛇床子素 20mg/支 英文名稱 Osthole 規格:
含量: 進口/國產 麝香酮 20mg/支 英文名稱 Muscone 規格:
水楊甙;水楊素 含量: 進口/國產 水楊苷 20mg/支 英文名稱 D-(−)-Salicin 規格:
水飛薊素;西利馬林 含量: 進口/國產 水飛薊賓 20mg/支 英文名稱 Silymarin 規格:
含量: 進口/國產 蕓香柚皮苷 20mg/支 英文名稱 Narirutin 規格:
含量: 進口/國產 芍藥苷 20mg/支 英文名稱 Paeoniflorin 規格:
含量: 進口/國產 鼠李糖 20mg/支 英文名稱 L-Rhamnose 規格:
腫瘤細胞
上一個:如何降低腫瘤細胞分離中的污染
下一個:如何選擇原代細胞常用的熒光素 ?
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