蛋白表達及純化：

1.培養(yǎng)500ml哺乳動物細胞，然后將重組質(zhì)粒轉(zhuǎn)染到細胞中，通過瞬時表達產(chǎn)生目標蛋白。

2.收集含有目標蛋白的部分（細胞或培養(yǎng)上清）。

3.通過親和，離子交換，疏水及凝膠過濾等多種層析方法純化表達的重組蛋白。

4.通過SDS-PAGE電泳檢測每步結(jié)果并控制最終產(chǎn)品質(zhì)量。

5.通過Western-blot驗證目標蛋白正確性。
公司產(chǎn)品僅供科研使用，不得用于臨床！

商品介紹：

相關(guān)產(chǎn)品：

轉(zhuǎn)醛縮酶(TALDO1)重組蛋白Recombinant Meningioma Expressed Antigen 5 (MGEA5)

轉(zhuǎn)甲狀腺素蛋白(PALB)重組蛋白Recombinant Matrix Metalloproteinase 13 (MMP13)

周期素依賴性激酶抑制因子3(CDKN3)重組蛋白Recombinant Matrix Metalloproteinase 2 (MMP2)

周期素依賴性激酶9(CDK9)重組蛋白Recombinant Matrix Metalloproteinase 3 (MMP3)   

操作步驟：

Ⅰ 實體組織蛋白的提取

1． 在每1mL 冷Lysis Buffer加入10 μL磷酸酶抑制劑， 1 μL蛋白酶抑制劑和 5μL 100mM PMSF，混勻。冰上保存數(shù)分鐘待用。

2．  每100mg固體組織置于培養(yǎng)皿中，剪碎成3mm×3mm左右的小塊，加入0.5～1 mL冷 Lysis Buffer，玻璃勻漿器上下手動勻漿15次，注意低溫操作；

3． 取組織勻漿液轉(zhuǎn)移到1.5mL預冷的離心管，離心10000轉(zhuǎn)/分，4℃離心5 min；

4． 取上清轉(zhuǎn)移至新的預冷的離心管中，即為全蛋白提取物，蛋白定量（Bradford法、BCA法）；

5． 分裝保存于-70℃,避免反復凍融。

Ⅱ 培養(yǎng)細胞蛋白提取

1． 貼壁培養(yǎng)的細胞，吸去培養(yǎng)基后，加入10mL/150mm培養(yǎng)板的冷PBS洗兩次，每次振搖數(shù)次以盡量去除培養(yǎng)液；

2． 懸浮培養(yǎng)的細胞或用細胞刮子刮下的貼壁細胞，將細胞及培養(yǎng)液移至離心管中， 1000轉(zhuǎn)/分離心10 min，再用10mL/150mm培養(yǎng)板的冷PBS，1000轉(zhuǎn)/分離心5 min洗兩次；

3． 在每 1mL冷 Lysis Buffer加入10μL磷酸酶抑制劑， 1μL蛋白酶抑制劑和5μL 100mM PMSF，混勻。冰上保存數(shù)分鐘待用。

4． 細胞洗滌后，轉(zhuǎn)至新的預冷的離心管中，加入上述配制好的冷Lysis Buffer，加入量如下表所示：

5．置于4℃搖床平臺上，溫和振蕩15 min；

6． 14,000rpm，4℃離心15min，取上清為全蛋白提取物, 蛋白定量（Bradford法、BCA法）；

7． 分裝保存于-70℃,避免反復凍融。

注意事項：

1、不同細胞或組織樣品所需的固定時間有所不同，應(yīng)當根據(jù)細胞或組織的種類以及組織塊的大小來調(diào)整固定時間。

2、雖然作用溫和，但能硬化組織，固定時間過久會導致組織變脆，切片時易碎。因此固定時間通常不宜超過 24 小時。

3、醛基與抗原蛋白的氨基交聯(lián)形成羧甲基，使抗原決定簇的三維構(gòu)象出現(xiàn)空間障礙。分子間交聯(lián)形成的網(wǎng)格結(jié)構(gòu)可能部分或 掩蓋某些抗原決定簇，使之不能充分暴露，可造成假陰性的染色，影響免疫組化結(jié)果。因此，4%固定的細胞或組織樣品在進行免疫組化檢測時，有時需要對抗原先進行修復，然后才能進行免疫染色等后續(xù)操作。

4、本產(chǎn)品對人體有害，操作時請小心，并注意有效防護以避免直接接觸人體或吸入體內(nèi)。

5、為了您的安全和健康，請穿實驗服并戴一次性手套操作 
TOP2A產(chǎn)品名稱: DNA拓普西異構(gòu)meiⅡ抗體產(chǎn)品別名: Topoisomerase II-α;

CKLFH3產(chǎn)品名稱: 趨化su樣因子超家族成員3抗體交叉反應(yīng): Human, Mouse, Rat, Dog, Cow, Sheep

GLRA4產(chǎn)品名稱: 甘氨suan受體α4抗體交叉反應(yīng): Human, Mouse, Rat, Chicken, Dog, Pig, Cow, Horse, Sheep

G1switch 2產(chǎn)品名稱: G0/G1期開關(guān)調(diào)節(jié)蛋白2抗體交叉反應(yīng): Human, Mouse, Rat, Horse

ZG16B產(chǎn)品名稱: mei原顆粒同源蛋白16B抗體交叉反應(yīng): Human

PEX16產(chǎn)品名稱: 過氧化物mei體生物合成因子16抗體交叉反應(yīng): Human, Mouse, Rat, Dog, Pig, Cow, Horse, Rabbit, Sheep

Diphtheria toxin fragment A產(chǎn)品名稱: 白喉毒suA抗體標記: Unconjugated

VGF產(chǎn)品名稱: 神經(jīng)調(diào)節(jié)肽VGF抗體交叉反應(yīng): Human, Mouse, Rat, Dog, Cow, Horse, Rabbit

Cystatin C產(chǎn)品名稱: 胱抑suC/半胱氨suan蛋白mei劑C抗體交叉反應(yīng): Human, Mouse, Rat

SCAP產(chǎn)品名稱: 固醇調(diào)節(jié)元件結(jié)合蛋白裂解激活蛋白單克隆抗體交叉反應(yīng): Human   

蘇氨酰tRNA合成酶2(TARS2)重組蛋白人Fission人1蛋白(FIS1)ELISA試劑盒FIS1Fission1蛋白elisa檢測試劑盒Human Fission 1(FIS1)ELISA Kit

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