SERPINA3重組兔單克隆抗體

英文別名：AACT_HUMAN; SERPINA3; alpha-1-antichymotrypsin; ACT; Cell growth-inhibiting gene 24/25 protein; Serpin A3; GIG24; GIG25; serpin family A member 3;

交叉反應：Human

抗體來源：Rabbit

免疫原：Full length native Protein : 1-423/423

亞型：IgG

性狀：Lyophilized or Liquid

純化方法：affinity purified by Protein A

克隆類型：Recombinant

克隆號：A12D5

理論分子量：45 kDa

濃度：1mg/ml

儲存液：PBS, Glycerol, BSA.

研究領域：Cardiovascular > Blood > Serum Proteins

Cell Biology > Proteolysis / Ubiquitin > Proteolytic enzymes > Other proteases

Neuroscience > Neurology process > Neurodegenerative disease > Alzheimer's disease > Proteases

簡介：

α-1抗胰（SERPINA3，又稱α-1抗，A1ACT）是一種蛋白酶抑制劑（Serpin），屬于Serpin超家族成員，主要功能是抑制中性粒細胞彈性蛋白酶和肥大細胞類，參與炎癥調節和血管緊張素轉化酶（ACE1→ACE2）的轉化過程?。

產品特性：

?抗體類型?：重組兔單克隆抗體，通過基因工程技術制備，具有高特異性和低交叉反應性?。

?應用范圍?：適用于Western Blot（WB）、免疫組化（IHC）、免疫熒光（IF）等實驗，可檢測人、小鼠、大鼠等物種的SERPINA3蛋白表達?。

實驗方法：

1. ?樣本制備?

?組織樣本?：取新鮮組織（如肝、肺）或石蠟包埋組織，用PBS沖洗后勻漿，離心（12,000 rpm，10分鐘）取上清液?。

?細胞樣本?：培養細胞用消化后裂解（含蛋白酶抑制劑），離心后收集上清?。

2. ?抗體稀釋?

?推薦稀釋比例?：

Western Blot（WB）：1:1000-1:5000（含1% BSA的TBS-Tween 20緩沖液）?。

免疫組化（IHC）：1:200-1:1000（需抗原修復）?。

3. ?Western Blot實驗步驟?

?

?電泳與轉膜?：SDS-PAGE分離蛋白后轉至PVDF膜，5%脫脂牛奶封閉1小時?。

?孵育抗體?：一抗4℃過夜，二抗（HRP標記）室溫1小時?。

?顯影?：ECL化學發光法檢測信號?。

4. ?免疫組化（IHC）?

?抗原修復?：石蠟切片經檸檬酸鈉緩沖液（pH 6.0）高壓修復?。

?封閉與孵育?：3% H?O?滅活內源酶，一抗4℃過夜?。

?顯色?：DAB顯色，蘇木精復染?。

操作方法及相關技術要點：

一、抗體制備流程

?免疫方案設計?

采用健康新西蘭白兔（2-3kg），以SERPINA3重組蛋白與弗氏佐劑（初免）或不佐劑（加強免疫）乳化后，通過皮下/肌肉注射免疫。抗原劑量為100-500μg/次，間隔2-4周加強免疫3-5次，通過ELISA監測血清效價?。

?B細胞分離與單克隆化?

末次免疫后1-2周采集脾臟，研磨制備單細胞懸液，通過流式分選或有限稀釋法獲取特異性B細胞?。

采用單B細胞技術時，需通過RT-PCR擴增重/輕鏈可變區基因，并克隆至表達載體?。

二、抗體純化與鑒定

?表達與純化?

雜交瘤細胞或重組表達系統（如HEK293）培養后，通過蛋白A/G親和層析或離子交換層析純化抗體?。

聚乙二醇化修飾需檢測PEG殘留量及錯配異構體（RP-UPLC法）。

?質量控制?

?活性檢測?：ELISA法測定與SERPINA3抗原結合活性，EC50值需符合標準。

?純度分析?：SEC-HPLC檢測單體含量（>99%），CEX-HPLC分析電荷異質性。

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