細胞簡介：

產品名稱 大鼠浦肯野細胞

組織來源 小腦組織

產品規格 5×10^5Cells/T25

細胞簡介 大鼠浦肯野細胞分離自小腦皮質組織；小腦的表面被覆著一層灰質，叫小腦皮質，小腦皮質分為3層，從表及里分別為分子層、浦肯野細胞層和顆粒細胞層。皮質里含有星狀細胞、籃狀細胞、浦肯野細胞、高爾基細胞和顆粒細胞等5種神經元。浦肯野細胞發出的軸突組成小腦皮質的傳出纖維，終止于小腦白質內的神經核。浦肯野細胞（Purkinje cell）是從小腦皮質發出的能夠傳出沖動的神經元。人的小腦皮質約有1500萬個浦肯野細胞。浦肯野細胞還廣泛分布于心室。顯著的電生理特點是傳導性強，傳導速度快，可達4000 mm/s。屬快反應自律型細胞，具有舒張期自動除極化的性能，因而有自律性，但自律性強度明顯低于竇房結P細胞。這類細胞常常平行排列，細胞內電阻低，只有心室細胞的1/3。小腦：浦肯野細胞是小腦皮質中大的神經元，細胞體呈梨形，頂端發出2-3條粗大的主樹突，向外伸入分子層。主樹突沿途分支繁茂，形如展開的、扁薄的扇形，鋪展在與小腦葉片長軸垂直的平面上。樹突分支上有大量的樹突棘，與傳入纖維構成廣泛的突觸聯系，接受傳入小腦的全部信息。軸突由細胞底部（與主樹突相對方向）發出，細長，離開胞體不遠便形成有髓神經纖維，向內經顆粒層離開皮質進入白質，組成小腦皮質的傳出纖維，終止于小腦內部的神經核團。一個浦肯野細胞的軸突約形成500個終末膨大，約與小腦深部核團的35個神經元形成突觸。心臟浦肯野細胞常常平行排列，幾個細胞互相以漿膜連接排成一個小束，小束外包繞著基底膜。細胞內含肌原纖維很少，胞漿區內充滿糖原顆粒、線粒體和肌漿網，細胞內電阻低，只有心室細胞的1/3。浦肯野細胞內無橫管系統，但膜電容比收縮細胞大，可能是由于其閏盤結構廣泛而復雜，提供了較大的表面積的緣故。浦肯野細胞閏盤的主要成分是縫隙連接，粒著膜占的比例很少，這些可能是構成浦肯野細胞傳導快的形態學基礎。

方法簡介 實驗室分離的大鼠浦肯野細胞采用消化法結合神經元專用培養基、化學試劑抑制法篩選制備而來，細胞總量約為5×10? cells/瓶。

質量檢測 實驗室分離的大鼠浦肯野細胞經Neph3免疫熒光鑒定，純度可達90%以上，且不含有HIV-1、HBV、HCV、支原體、細菌、酵母和真菌等。

產品信息：

培養信息：

自備試劑：0.25%、多聚-L-賴溶液（1×）或多聚-L-賴溶液（10×）、PBS、培養基

包被條件：PLL（0.1mg/mL）

培養基：大鼠浦肯野細胞培養基(含脂質濃縮液、BSA、Monothioglycerol、Transferrin、Penicillin、Streptomycin等)

換液頻率：每2-3天換液一次

生長特性：貼壁

細胞形態：神經元細胞樣

傳代比例：不傳代

傳代特性：不增殖；不傳代

消化液：0.25%

凍存步驟：

凍存前準備?

確保細胞處于對數生長期，密度達80%-90%?。

配制凍存液：推薦50%基礎培養基+40%FBS+10%DMSO?。

?細胞處理?

棄去培養上清，用PBS潤洗1-2次?。

加入消化后，用含血清的培養基終止消化。

?凍存操作?

離心（1000RPM，3-4分鐘）后棄上清，用凍存液重懸細胞?。

分裝至凍存管（每管1mL，細胞數100-400萬）?。

4℃靜置10分鐘，-20℃ 2小時，-80℃過夜后轉入液氮?。

公司正在出售的產品：

操作實驗步驟：

1. 原代細胞分離

?組織獲取?：采用成年SD大鼠，快速取出海馬或脊髓組織，置于低溫人工腦脊液（0-4℃）中保存?。

?消化與離心?：使用木瓜蛋白酶消化組織，通過Optiprep不連續梯度離心，收集組織細胞密集帶?。

?細胞培養?：將細胞懸液接種于含B27添加劑和堿性成纖維細胞生長因子2（FGF-2）的培養基中，置于37℃、5% CO2孵箱中培養?。

2. 細胞純化

?差速貼壁法?：通過搖床分離（200r/min去除小膠質細胞，280r/min收集少突前體細胞）?。

?免疫磁珠分選?：利用NG2抗體標記后通過磁珠分選，提高純度?。

3. 細胞傳代與凍存

?傳代?：使用含EDTA和DNase I的消化液處理細胞，按1:3比例傳代?。

?凍存?：將細胞重懸于凍存液（含10% DMSO和90%胎牛血清），程序降溫后保存于液氮中?。

4. 功能驗證

?免疫熒光染色?：檢測NG2、GFAP等標志物表達，確認細胞純度?。

?電生理記錄?：通過膜片鉗技術檢測細胞電特性（如鈉電流）。