細胞簡介：

產品名稱 大鼠視網膜神經節細胞

簡稱 RGCs

組織來源 視網膜組織

產品規格 5×10^5Cells/T25

細胞簡介 大鼠視網膜神經節細胞分離自視網膜組織；視網膜居于眼球壁的內層，是一層透明的薄膜。視網膜由色素上皮層和視網膜感覺層組成，兩層間在病理情況下可分開，稱為視網膜脫離。色素上皮層與脈絡膜緊密相連，由色素上皮細胞組成，它們具有支持和營養光感受器細胞、遮光、散熱以及再生和修復等作用。組織學上視網膜分為10層，由外向內分別為：色素上皮層、視錐、視桿細胞層、外界膜、外顆粒層、外叢狀層、內顆粒層、內叢狀層、神經節細胞層、神經纖維層、內界膜。視網膜內層為襯于血管膜內面的一層薄膜，有感光作用；后部鼻側有一視神經乳頭。視網膜上的感覺層是由三個神經元組成。神經元是視細胞層，專司感光，它包括錐細胞和桿細胞。視桿細胞主要在離中心凹較遠的視網膜上，而視錐細胞則在中心凹處多。第二層叫雙節細胞，約有10到數百個視細胞通過雙節細胞與一個神經節細胞相聯系，負責聯絡作用。第三層叫節細胞層，專管傳導。視網膜是一層菲薄的但又非常復雜的結構，它貼于眼球的后壁部，傳遞來自視網膜感受器沖動的神經纖維跨越視網膜表面，經由視神經到達出口。視網膜的分辨力是不均勻的，在黃斑區，其分辨能力強。視網膜神經節細胞貼壁后呈單層排列，部分細胞聚集成團，細胞呈圓形或橢圓形，核圓且相對透明，有些細胞膜上伸出短而小的突起；該細胞為高度分化細胞，在體外屬于不增殖群。視網膜神經節細胞是青光眼病理性損害的主要細胞，視網膜神經節細胞的死亡可導致視功能不可逆損傷，研究視網膜神經節細胞損害的細胞學和分子生物學機制有利于青光眼發病機制的研究。

方法簡介 實驗室分離的大鼠視網膜神經節細胞采用-膠原酶聯合消化法，結合視網膜神經節細胞專用培養基培養和化學試劑抑制法篩選制備而來，細胞總量約為5×10? cells/瓶。

質量檢測 實驗室分離的大鼠視網膜神經節細胞經CD90免疫熒光鑒定，純度可達90%以上，且不含有HIV-1、HBV、HCV、支原體、細菌、酵母和真菌等。

產品信息：

培養信息：

自備試劑：0.25%、多聚-L-賴溶液（1×）或多聚-L-賴溶液（10×）、PBS、培養基

包被條件：PLL（0.1mg/mL）

培養基：大鼠視網膜神經節細胞培養基(基礎培養基，含FBS、B-27Supplement、Penicillin、Streptomycin等)

換液頻率：每2-3天換液一次

生長特性：貼壁

細胞形態：神經元細胞樣

傳代比例：不傳代

傳代特性：屬于終末分化細胞；屬于不增殖細胞群

消化液：0.25%

凍存步驟：

凍存前準備?

確保細胞處于對數生長期，密度達80%-90%?。

配制凍存液：推薦50%基礎培養基+40%FBS+10%DMSO?。

?細胞處理?

棄去培養上清，用PBS潤洗1-2次?。

加入消化后，用含血清的培養基終止消化。

?凍存操作?

離心（1000RPM，3-4分鐘）后棄上清，用凍存液重懸細胞?。

分裝至凍存管（每管1mL，細胞數100-400萬）?。

4℃靜置10分鐘，-20℃ 2小時，-80℃過夜后轉入液氮?。

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操作實驗步驟：

1. 原代細胞分離

?組織獲取?：采用成年SD大鼠，快速取出海馬或脊髓組織，置于低溫人工腦脊液（0-4℃）中保存?。

?消化與離心?：使用木瓜蛋白酶消化組織，通過Optiprep不連續梯度離心，收集組織細胞密集帶?。

?細胞培養?：將細胞懸液接種于含B27添加劑和堿性成纖維細胞生長因子2（FGF-2）的培養基中，置于37℃、5% CO2孵箱中培養?。

2. 細胞純化

?差速貼壁法?：通過搖床分離（200r/min去除小膠質細胞，280r/min收集少突前體細胞）?。

?免疫磁珠分選?：利用NG2抗體標記后通過磁珠分選，提高純度?。

3. 細胞傳代與凍存

?傳代?：使用含EDTA和DNase I的消化液處理細胞，按1:3比例傳代?。

?凍存?：將細胞重懸于凍存液（含10% DMSO和90%胎牛血清），程序降溫后保存于液氮中?。

4. 功能驗證

?免疫熒光染色?：檢測NG2、GFAP等標志物表達，確認細胞純度?。

?電生理記錄?：通過膜片鉗技術檢測細胞電特性（如鈉電流）。