細(xì)胞簡(jiǎn)介：

產(chǎn)品名稱 大鼠子宮內(nèi)膜上皮細(xì)胞

組織來源 子宮組織

產(chǎn)品規(guī)格 5×10^5Cells/T25

細(xì)胞簡(jiǎn)介 大鼠子宮內(nèi)膜上皮細(xì)胞分離自子宮組織；子宮是孕育胎兒的器官，位于盆腔中部，膀胱與直腸之間，其位置可隨膀胱與直腸的充盈程度或體位而有變化。子宮的正常位置主要依靠子宮諸韌帶、盆膈、尿生殖膈及會(huì)陰中心腱等結(jié)構(gòu)維持，這些結(jié)構(gòu)受損或松弛時(shí)，可以引起子宮脫垂。子宮內(nèi)膜即黏膜，由上皮（屬單層柱狀上皮，有分泌細(xì)胞和纖毛細(xì)胞二種）和固有膜（由結(jié)締組織構(gòu)成，其內(nèi)有大量的星形細(xì)胞，稱為基質(zhì)細(xì)胞）組成，子宮內(nèi)膜可分為淺表的功能膜和深部的基底層，功能層較厚，約占內(nèi)膜厚度的4/5；基底層較薄較致密，約占1/5，功能層可剝脫，而基底層不可剝脫。子宮內(nèi)膜上皮細(xì)胞主要功能：①子宮內(nèi)膜亦稱子宮黏膜，是指構(gòu)成哺乳類子宮內(nèi)壁的一層；②子宮內(nèi)膜對(duì)動(dòng)情素和孕激素都起反應(yīng)，因此可隨著性周期（發(fā)情周期、月經(jīng)周期）發(fā)生顯著的變化。子宮內(nèi)膜與胚胎附植密切相關(guān)，在生殖生理的研究中占重要地位。在胚胎與母體“對(duì)話"的過程中，子宮內(nèi)膜上皮細(xì)胞充當(dāng)了極其重要的角色。子宮內(nèi)膜構(gòu)成雌性哺乳動(dòng)物子宮壁的內(nèi)層，位于子宮腔面，在動(dòng)物生殖生理活動(dòng)中占有重要地位。子宮和子宮內(nèi)膜是維持雌性動(dòng)物生理功能和生育能力的重要器官，子宮內(nèi)膜的再生修復(fù)是子宮的重要生理功能。體外培養(yǎng)的子宮內(nèi)膜上皮細(xì)胞對(duì)于研究其生理功能、藥物作用以及各種致病因素作用下的病理生理改變具重要意義。

方法簡(jiǎn)介 實(shí)驗(yàn)室分離的大鼠子宮內(nèi)膜上皮細(xì)胞采用膠原酶消化法，差速貼壁法、結(jié)合上皮細(xì)胞專用培養(yǎng)基培養(yǎng)篩選制備而來，細(xì)胞總量約為5×10? cells/瓶。

質(zhì)量檢測(cè) 實(shí)驗(yàn)室分離的大鼠子宮內(nèi)膜上皮細(xì)胞經(jīng)Cytokeratin-19免疫熒光鑒定，純度可達(dá)90%以上，且不含有HIV-1、HBV、HCV、支原體、細(xì)菌、酵母和真菌等。

產(chǎn)品信息：

培養(yǎng)信息：

自備試劑： 0.25%  、鼠尾膠原蛋白Ⅰ型（1×）或鼠尾膠原蛋白Ⅰ型（1 mg/mL）  、PBS  、培養(yǎng)基

包被條件： 鼠尾膠原Ⅰ（2-5 μg/cm2）

培養(yǎng)基： 大鼠子宮內(nèi)膜上皮細(xì)胞 培養(yǎng)基(含F(xiàn)BS、生長(zhǎng)添加劑、Penicillin、Streptomycin等)

換液頻率： 每2-3天換液一次

生長(zhǎng)特性： 貼壁

細(xì)胞形態(tài)： 上皮細(xì)胞樣

傳代比例： 1:2

傳代特性： 可傳1-2代

消化液：0.25%

凍存步驟：

凍存前準(zhǔn)備?

確保細(xì)胞處于對(duì)數(shù)生長(zhǎng)期，密度達(dá)80%-90%?。

配制凍存液：推薦50%基礎(chǔ)培養(yǎng)基+40%FBS+10%DMSO?。

?細(xì)胞處理?

棄去培養(yǎng)上清，用PBS潤(rùn)洗1-2次?。

加入消化后，用含血清的培養(yǎng)基終止消化。

?凍存操作?

離心（1000RPM，3-4分鐘）后棄上清，用凍存液重懸細(xì)胞?。

分裝至凍存管（每管1mL，細(xì)胞數(shù)100-400萬）?。

4℃靜置10分鐘，-20℃ 2小時(shí)，-80℃過夜后轉(zhuǎn)入液氮?。

公司正在出售的產(chǎn)品：

操作實(shí)驗(yàn)步驟：

1. 原代細(xì)胞分離

?組織獲取?：采用成年SD大鼠，快速取出海馬或脊髓組織，置于低溫人工腦脊液（0-4℃）中保存?。

?消化與離心?：使用木瓜蛋白酶消化組織，通過Optiprep不連續(xù)梯度離心，收集組織細(xì)胞密集帶?。

?細(xì)胞培養(yǎng)?：將細(xì)胞懸液接種于含B27添加劑和堿性成纖維細(xì)胞生長(zhǎng)因子2（FGF-2）的培養(yǎng)基中，置于37℃、5% CO2孵箱中培養(yǎng)?。

2. 細(xì)胞純化

?差速貼壁法?：通過搖床分離（200r/min去除小膠質(zhì)細(xì)胞，280r/min收集少突前體細(xì)胞）?。

?免疫磁珠分選?：利用NG2抗體標(biāo)記后通過磁珠分選，提高純度?。

3. 細(xì)胞傳代與凍存

?傳代?：使用含EDTA和DNase I的消化液處理細(xì)胞，按1:3比例傳代?。

?凍存?：將細(xì)胞重懸于凍存液（含10% DMSO和90%胎牛血清），程序降溫后保存于液氮中?。

4. 功能驗(yàn)證

?免疫熒光染色?：檢測(cè)NG2、GFAP等標(biāo)志物表達(dá)，確認(rèn)細(xì)胞純度?。

?電生理記錄?：通過膜片鉗技術(shù)檢測(cè)細(xì)胞電特性（如鈉電流）。