商品屬性：

產品信息：

產品名稱 人食管成纖維細胞

組織來源 食管組織

產品規格 5×10^5Cells/T25

細胞簡介 人食管成纖維細胞分離自食管組織；食管是咽和胃之間的消化管，食管在系統發生上起初很短，隨著頸部的伸長和心肺的下降，而逐漸增長。食管可分為頸段、胸段和腹段。脊椎動物食管的頸段位于氣管背后和脊柱前端，胸段位于左、右肺之間的縱膈內，胸段通過膈孔與腹腔內腹相連，腹段很短與胃相連。在發育過程中，食管的上皮細胞增殖，由單層變為復層，食管使管腔變狹窄，甚至一度閉鎖，以后管腔又重新出現。哺乳動物的食管結構上由內向外分四層：黏膜層、黏膜下層、肌層和外膜。其中，黏膜層，包括上皮、固有層和黏膜肌層。食管的外膜，由疏松結締組織構成，富有血管、淋巴管及神經。主要包含食管成纖維細胞，成纖維細胞（Fibroblast）是疏松結締組織的主要細胞成分，由胚胎時期的間充質細胞分化而來。成纖維細胞較大，輪廓清楚，多為突起的紡錘形或星形的扁平狀結構，其細胞核呈規則的卵圓形，核仁大而明顯。成纖維細胞功能活動旺盛，細胞質嗜弱堿性，具明顯的蛋白質合成和分泌活動，在一定條件下，它可以實現跟纖維細胞的互相轉化；成纖維細胞對不同程度的細胞變性、壞死和組織缺損的修復有著十分重要的作用。剛分離的表皮成纖維細胞呈圓形、折光性良好，懸浮于培養基中。30 min細胞貼壁，其中部分開始伸出偽足，表現為小的突起；6 h后細胞基本貼壁，伸展成梭形，胞核清晰，分布較均勻，散在生長，不聚集成團；細胞生長迅速，5-7天即呈融合狀態，細胞排列緊密，有的交叉重疊生長，平坦、胞體較大，細胞質透明，細胞核較大，呈橢圓形，顏色淡。細胞融合，并彼此連接成網狀；細胞呈突起的紡錘形或星形的扁平分布。

方法簡介 實驗室分離的人食管成纖維細胞采用-膠原酶混合消化法結合差速貼壁法制備而來，細胞總量約為5×10? cells/瓶。

質量檢測 實驗室分離的人食管成纖維細胞經Vimentin免疫熒光鑒定，純度可達90%以上，且不含有HIV-1、HBV、HCV、支原體、細菌、酵母和真菌等。

培養信息：

自備試劑： 0.25%  、PBS  、培養基

培養基： 人食管成纖維細胞 培養基(基礎培養基，含FBS、bFGF、Insulin、Penicillin、Streptomycin等)

換液頻率： 每2-3天換液一次

生長特性： 貼壁

細胞形態： 成纖維細胞樣

傳代比例： 1:2

傳代特性： 可傳3-5代左右；3代以內狀態佳

消化液：0.25%

原代細胞培養步驟：

取材與預處理?：取新生24小時內Wistar大鼠，麻醉后無菌取出肺組織，PBS沖洗去除血管和氣管?。

?消化?：剪碎肺組織，依次用0.2%膠原酶（37℃震蕩1h）和0.5%酶（消化30min）消化，終止后過濾?。

?純化?：采用IgG吸附法去除未貼壁細胞，離心后重懸接種?。

?培養?：使用含10%胎牛血清的DMEM培養基，37℃、5% CO?培養，24小時后換液?。

培養方法?：

原代細胞培養?

?材料?：新生大鼠肺組織、0.2%膠原酶、0.5%酶、DMEM培養基（含10%胎牛血清）。

?步驟?：

取出肺組織，PBS沖洗去除血管和氣管，剪碎。

依次用膠原酶（37℃震蕩1h）和酶（消化30min）消化，終止后過濾。

通過IgG吸附法去除未貼壁細胞，離心后接種于培養皿。

37℃、5% CO?培養，24小時后換液。

?注意事項?：消化時間需嚴格控制（胎鼠25分鐘，新生鼠40-60分鐘），避免過度消化導致細胞死亡。

?細胞系培養?

?傳代?：0.25%消化1-2分鐘，加入含血清培養基終止，按1:2-1:4比例傳代。

?條件?：DMEM+10%胎牛血清，每周換液2-3次，37℃、5% CO?培養。

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