細胞簡介：

產品名稱 小鼠脊髓神經干細胞

組織來源 脊髓組織

產品規格 5×10^5Cells/T25

細胞簡介 小鼠脊髓神經干細胞分離自脊髓組織；脊髓是細細的管束狀的神經結構，位于脊柱的椎管內且被脊椎保護；是源自腦的中樞神經系統延伸部分。中樞神經系統的細胞依靠復雜的聯系來處理傳遞信息。脊髓的主要功能是傳送腦與外周之間的神經信息。人和脊椎動物中樞神經系統的部分，在椎管里面，上端連接延髓，兩旁發出成對的神經，分布到四肢、體壁和內臟。脊髓的內部有個H形（蝴蝶型）灰質區，主要由神經細胞構成；在灰質區周圍為白質區，主要由有髓神經纖組成；脊髓是許多簡單反射的中樞。脊髓兩旁發出許多成對的神經（稱為脊神經）分布到全身皮膚、肌肉和內臟器官。脊髓是周圍神經與腦之間的通路，也是許多簡單反射活動的低級中樞。按脊神經的出入可把脊髓也分為相應的31節，31對脊神經就是由不同的脊椎發出的。神經干細胞是類具有分裂潛能和自更新能力的母細胞，它可以通過不對等的分裂方式產生神經組織的各類細胞。需要強調的是，在腦脊髓等所有神經組織中，不同的神經干細胞類型產生的子代細胞種類不同，分布也不同。神經干細胞作為干細胞的種，它具有其它所有干細胞的基本特征：具有自我持和自我更新能力，具有多種分化潛能，具有分化為本系統大部分類型細胞的能力，這種自我更新和分化潛能可以持相當長的時間甚至終生，對損傷和疾病具有反應能力。神經干細胞在疾病、損傷狀態下具有增殖、遷移，并向神經細胞、星形膠質細胞和少突膠質細胞分化的能力，已成為神經系統損傷修復和再生研究的熱點，體外建立穩定的神經干細胞培養模型是其基礎和臨床應用的前提。神經干細胞在培養3-4 d后，可形成神經球，神經球在培養基中呈懸浮生長。

方法簡介 實驗室分離的小鼠脊髓神經干細胞采用消化后差速貼壁，結合神經干細胞專用培養基培養篩選制備而來，總量約為5×10? cells/瓶。

質量檢測 實驗室分離的小鼠脊髓神經干細胞經Nestin免疫熒光鑒定，純度可達90%以上，且不含有HIV-1、HBV、HCV、支原體、細菌、酵母和真菌等。

產品信息：

培養信息：

自備試劑： Accutase消化液或0.25% 、PBS 、培養基

培養基： 小鼠脊髓神經干細胞培養基(基礎培養基，含B-27 Supplement、EGF、bFGF、Penicillin、Streptomycin等)

換液頻率： 每2-3天換液次

生長特性： 懸浮

細胞形態： 球形

傳代比例： 1:2

傳代特性： 可傳1-3代左右

消化液： Accutase消化液或0.25%

小鼠脊髓神經干細胞體外培養周期有限；建議使用配套的專用生長培養基及正確的操作方法來培養，以此保證該細胞的佳培養狀態。

凍存步驟：

凍存前準備?

確保細胞處于對數生長期，密度達80%-90%?。

配制凍存液：推薦50%基礎培養基+40%FBS+10%DMSO?。

?細胞處理?

棄去培養上清，用PBS潤洗1-2次?。

加入消化后，用含血清的培養基終止消化。

?凍存操作?

離心（1000RPM，3-4分鐘）后棄上清，用凍存液重懸細胞?。

分裝至凍存管（每管1mL，細胞數100-400萬）?。

4℃靜置10分鐘，-20℃ 2小時，-80℃過夜后轉入液氮?。

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操作實驗步驟：

1. 原代細胞分離

?組織獲取?：采用成年SD大鼠，快速取出海馬或脊髓組織，置于低溫人工腦脊液（0-4℃）中保存?。

?消化與離心?：使用木瓜蛋白酶消化組織，通過Optiprep不連續梯度離心，收集組織細胞密集帶?。

?細胞培養?：將細胞懸液接種于含B27添加劑和堿性成纖維細胞生長因子2（FGF-2）的培養基中，置于37℃、5% CO2孵箱中培養?。

2. 細胞純化

?差速貼壁法?：通過搖床分離（200r/min去除小膠質細胞，280r/min收集少突前體細胞）?。

?免疫磁珠分選?：利用NG2抗體標記后通過磁珠分選，提高純度?。

3. 細胞傳代與凍存

?傳代?：使用含EDTA和DNase I的消化液處理細胞，按1:3比例傳代?。

?凍存?：將細胞重懸于凍存液（含10% DMSO和90%胎牛血清），程序降溫后保存于液氮中?。

4. 功能驗證

?免疫熒光染色?：檢測NG2、GFAP等標志物表達，確認細胞純度?。

?電生理記錄?：通過膜片鉗技術檢測細胞電特性（如鈉電流）。