細(xì)胞簡介：

產(chǎn)品名稱 小鼠甲狀腺濾泡上皮細(xì)胞

組織來源 甲狀腺組織

產(chǎn)品規(guī)格 5×10^5Cells/T25

細(xì)胞簡介 小鼠甲狀腺濾泡上皮細(xì)胞分離自甲狀腺組織；甲狀腺是脊椎動物非常重要的腺體，屬于內(nèi)分泌器官。在哺乳動物身體中，它位于頸部甲狀軟骨下方，氣管兩旁。甲狀腺表面有結(jié)締組織被膜，表面結(jié)締組織深入到腺實(shí)質(zhì)，將實(shí)質(zhì)分為許多不明顯的小葉，小葉內(nèi)有很多甲狀腺濾泡和濾泡旁細(xì)胞。甲狀腺控制使用能量的速度、制造蛋白質(zhì)、調(diào)節(jié)機(jī)體對其他賀爾蒙的敏感性。甲狀腺依靠制造甲狀腺素來調(diào)整這些反應(yīng)，有T3和T4。這兩者調(diào)控代謝、生長速率還有調(diào)解其他的身體系統(tǒng)。T3和T4由碘和酪胺酸合成。甲狀腺也生產(chǎn)降鈣素，調(diào)節(jié)體內(nèi)鈣的平衡。其中，甲狀腺濾泡上皮細(xì)胞（也稱為濾泡細(xì)胞或主要細(xì)胞）是在甲狀腺細(xì)胞是負(fù)責(zé)生產(chǎn)和分泌甲狀腺，甲狀腺素（T4）和三碘甲狀腺原（T3）。

方法簡介 實(shí)驗(yàn)室分離的小鼠甲狀腺濾泡上皮細(xì)胞采用-膠原酶混合消化法結(jié)合差速貼壁法，并通過上皮細(xì)胞專用培養(yǎng)基培養(yǎng)篩選制備而來，細(xì)胞總量約為5×10? cells/瓶。

質(zhì)量檢測 實(shí)驗(yàn)室分離的小鼠甲狀腺濾泡上皮細(xì)胞經(jīng)TG（甲狀腺球蛋白）免疫熒光鑒定，純度可達(dá)90%以上，且不含有HIV-1、HBV、HCV、支原體、細(xì)菌、酵母和真菌等。

產(chǎn)品信息：

培養(yǎng)信息：

自備試劑： 0.25% 、鼠尾膠原蛋白Ⅰ型（1×）或鼠尾膠原蛋白Ⅰ型（1 mg/mL） 、PBS 、培養(yǎng)基

包被條件： 鼠尾膠原Ⅰ（2-5 μg/cm2）

培養(yǎng)基： 小鼠甲狀腺濾泡上皮細(xì)胞培養(yǎng)基(含F(xiàn)BS、生長添加劑、Penicillin、Streptomycin等)

換液頻率： 每2-3天換液次

生長特性： 貼壁

細(xì)胞形態(tài)： 上皮細(xì)胞樣

傳代比例： 1:2

傳代特性： 可傳1-2代

消化液： 0.25%

凍存步驟：

凍存前準(zhǔn)備?

確保細(xì)胞處于對數(shù)生長期，密度達(dá)80%-90%?。

配制凍存液：推薦50%基礎(chǔ)培養(yǎng)基+40%FBS+10%DMSO?。

?細(xì)胞處理?

棄去培養(yǎng)上清，用PBS潤洗1-2次?。

加入消化后，用含血清的培養(yǎng)基終止消化。

?凍存操作?

離心（1000RPM，3-4分鐘）后棄上清，用凍存液重懸細(xì)胞?。

分裝至凍存管（每管1mL，細(xì)胞數(shù)100-400萬）?。

4℃靜置10分鐘，-20℃ 2小時(shí)，-80℃過夜后轉(zhuǎn)入液氮?。

公司正在出售的產(chǎn)品：

操作實(shí)驗(yàn)步驟：

1. 原代細(xì)胞分離

?組織獲取?：采用成年SD大鼠，快速取出海馬或脊髓組織，置于低溫人工腦脊液（0-4℃）中保存?。

?消化與離心?：使用木瓜蛋白酶消化組織，通過Optiprep不連續(xù)梯度離心，收集組織細(xì)胞密集帶?。

?細(xì)胞培養(yǎng)?：將細(xì)胞懸液接種于含B27添加劑和堿性成纖維細(xì)胞生長因子2（FGF-2）的培養(yǎng)基中，置于37℃、5% CO2孵箱中培養(yǎng)?。

2. 細(xì)胞純化

?差速貼壁法?：通過搖床分離（200r/min去除小膠質(zhì)細(xì)胞，280r/min收集少突前體細(xì)胞）?。

?免疫磁珠分選?：利用NG2抗體標(biāo)記后通過磁珠分選，提高純度?。

3. 細(xì)胞傳代與凍存

?傳代?：使用含EDTA和DNase I的消化液處理細(xì)胞，按1:3比例傳代?。

?凍存?：將細(xì)胞重懸于凍存液（含10% DMSO和90%胎牛血清），程序降溫后保存于液氮中?。

4. 功能驗(yàn)證

?免疫熒光染色?：檢測NG2、GFAP等標(biāo)志物表達(dá)，確認(rèn)細(xì)胞純度?。

?電生理記錄?：通過膜片鉗技術(shù)檢測細(xì)胞電特性（如鈉電流）。