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程序降溫盒提高細胞凍存的存活率的方法

1.細胞系實驗室凍存盒平時放4度，需要凍細胞時直接拿出來用就可以了。第二天轉移至液氮，貴重的細胞盡快轉移，不然會影響復蘇成活率的。一般是用5次就更換一下異丙醇。現在也有一些商品化凍存液可以直接丟進-80的，很方便，效果也不錯的。2.異丙醇的量是要保證的，不能低于表明的線，否則不能起到很好的程序性降溫作用，我們是在4度放置，放了細胞后立馬放到-80度冰箱，第二天再轉移到液氮，效果很不錯。異丙醇熔點：-87.9度的色透明具有乙醇氣味的可燃性有毒液體。注意了有可燃性!急性毒性：口服...

原代細胞培養玻璃器皿的清洗

①原代細胞浸泡：新購進的玻璃器皿常帶有灰塵，呈弱堿性，或帶有鉛、碑等有害物質，故先用自來水浸泡、水洗，然后再用2%~5%鹽酸浸泡或煮沸30min，水洗。要領：培養用后的玻璃器皿要立即泡入清水中，使下道刷洗工作能順利進行。用后的玻璃器皿常帶有大量的蛋白質附著，干涸后不易刷洗掉，用后要立即用清水浸泡。②刷洗：用軟毛刷、洗滌劑，刷去器皿上的雜質，沖洗晾干。要領：浸泡后的玻璃器皿用毛刷沾洗滌劑去器皿上的雜質、刷洗次太多，會損害器皿的表面光潔度，洗滌劑有使pH上升的趨勢，所以易選用軟毛...

原代細胞線粒體膜勢能的檢測

原代細胞線粒體在細胞凋亡的過程中起著樞紐作用，多種細胞凋亡刺激因子均可誘導不同的細胞發生凋亡，而線粒體跨膜電位的下降，被認為是細胞凋亡級聯反應過程中zui早發生的事件，它發生在細胞核凋亡特征(染色質濃縮、DNA斷裂)出現之前，一旦線粒體DYmt崩潰，則細胞凋亡不可逆轉。線粒體跨膜電位的存在，使一些親脂性陽離子熒光染料如Rhodamine123、3，3-Dihexyloxacarbocyanineiodide[DiOC6(3)]、Tetrechloro-tetraethylbe...

哺乳動物轉錄調控原理分析

細胞系RNA聚合酶II是三大RNA聚合酶之一，存在于基因轉錄裝置的核心位置，編碼蛋白質基因的轉錄受到RNA聚合酶的調控。RNA聚合酶解開DNA雙鏈，沿著一條鏈移動。在移動過程中，它們一邊“解讀”DNA鏈上的核苷，一邊合成一條相應的RNA鏈。由PolII合成的RNA就是mRNA，它們將合成蛋白質的指令傳給核糖體。過往的研究證實，在許多哺乳動物的多個基因進行轉錄時，RNAPII往往會在啟動子附近的某些特定區域發生停頓。這種停頓往往是發生在RNAPII復合體形成和轉錄起始之后。而這...

過氧化物酶標記測定法原理

腫瘤細胞原理：脫氧核糖核苷酸衍生物地高辛[(digoxigenin)-11-dUTP]在TdT酶的作用下,可以摻入到凋亡細胞雙鏈或單鏈DNA的3-OH末端,與dATP形成異多聚體,并可與連接了報告酶(過氧化物酶或堿性磷酸酶)的抗地高辛抗體結合.在適合底物存在下,過氧化物酶可產生很強的顏色反應,特異準確的定位出正在凋亡的細胞,因而可在普通光學顯微鏡下進行觀察.毛地黃植物是地高辛的*來源.在所有動物組織中幾乎不存在能與抗地高辛杭體結合的配體,因而非特異性反應很低.抗地高辛的特異性...

新生小鼠頸上交感神經元分散細胞培養

原代細胞交感神經系統在維持機體的正常功能和對環境的適應性反應中起著十分重要的作用。交感神經細胞培養特別有助于神經細胞發育和可塑性研究，利用體外培養系統可進行交感神經細胞的發生、死亡、形態和生化發育、遞質表形的獲得，以及靶組織與傳入纖維的突觸形成的研究。此外，通過體外培養系統可獲得關于神經營養因子、激素，細胞因子等調節交感神經元發育的信息，了解傳入纖維的輸入以及與靶組織的的機制。1、材料和方法實驗用出生當天的昆明種小鼠，在無菌條件下腹部朝上固定于塑料泡沫板上,用微解剖鑷在解剖顯...

常見的細胞因子受體檢測的方法介紹

（一）活細胞系吸收試驗原理將過量的待測細胞與*細胞因子共孵育，若細胞膜表面存在相應的細胞因子受體即可結合細胞因子，通過測定前、后細胞因子生物活性的對比情況可推測待測細胞表面細胞因子受體是否存在。方法1．過量的待測細胞、適量細胞因子準備。2．共孵育，時間根據待測細胞和細胞因子選擇。可設2h,4h,6h,8h和更長時間。3．離心（1500r/min,5分鐘）收集上清液。4．測定孵育前后的細胞因子活性。方法同細胞因子測定。注意事項此法簡便，適用于定性，但不適用于定量檢測。（二）核素...

原代細胞計數的操作步驟

（一）原代細胞計數1、將血球計數板及蓋片用擦試干凈，并將蓋片蓋在計數板上。2、將細胞懸液吸出少許，滴加在蓋片邊緣，使懸液充滿蓋片和計數板之間。3、靜置3分鐘。4、鏡下觀察，計算計數板四大格細胞總數，壓線細胞只計左側和上方的。然后按下式計算：細胞數/ml＝4大格細胞總數/4×10000注意：鏡下偶見由兩個以上細胞組成的細胞團，應按單個細胞計算，若細胞團占10%以上，說明分散不好，需重新制備細胞懸液。（二）原代細胞活力1、將細胞懸液以0.5ml加入試管中。2、加入0.5ml0.4...