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原代細胞的透過性

原代細胞的選擇透過性：這種膜可以讓水分子自由通過，細胞要選擇吸收的離子和小分子（如：氨基酸、葡萄糖）也可以通過，而其它的離子、小分子和大分子（如：信使RNA、蛋白質、核酸、蔗糖）則不能通過。膜蛋白：指細胞內各種膜結構中蛋白質成分。載體蛋白：膜結構中與物質運輸有關的一種跨膜蛋白質，細胞膜中的載體蛋白在協助擴散和主動運輸中都有特異性。細胞質：在細胞膜以內、細胞核以外的原生質，叫做細胞質。細胞質主要包括細胞質基質和細胞器。細胞質基質：細胞質內呈液態的部分是基質。是細胞進行新陳代謝的...

細胞系自動化篩選技術

zui常用的細胞系方法是檢測96孔細胞培養板中蛋白的濃度；另外一個方法是讓細胞在軟瓊脂上生長形成集落，然后利用原位免疫沉淀技術獲得高產細胞。近年來，發展起來的高通量自動化篩選技術也被受關注。為實現克隆的高表達，在有些情況下外源基因擴增，比如以CHO用作宿主細胞；有些情況則不需要，比如雜交瘤細胞。為了實現外源基因的擴增，將細胞在高濃度的擴增標記（比如dhfr）抑制劑的壓力下生長。細胞存活需要擴增標記。高濃度的抑制劑能夠殺死除擁有多個擴增標記基因以外的絕大多數細胞。在標記基因擴增...

細胞株修復特定基因

雖然細胞株DNA突變是物種進化的原動力，但突變帶來的損傷也往往是危害極大的。因此，物種自身進化出了保護自己不受基因突變帶來的損傷的修復機制。其中一類機制叫做“DNA錯配損傷修復”，它能夠改變由于基因在分裂過程中的突變。牛津大學的研究者們研究了模式植物擬南芥因MMR缺陷而導致五代之內積累的9000個基因突變，以及將其與MMR機制正常的植株的基因突變進行了比較。這項研究對于人類健康來說具有重要的意義，而且對于理解腫瘤的發育過程中細胞內部發生的改變十分有用。MMR缺陷將導致細胞變得...

腫瘤細胞無法分裂與再生

腫瘤細胞建立起線粒體這一細胞的發電所來增加氧化作用。線粒體大量生成氧自由基損害DNA，zui終造成了細胞周期阻滯。Sadek博士說:“我們發現了以往未知的一個介導心肌細胞周期阻滯的保護機制，其是因氧依賴性有氧代謝而產生。”Sadek博士說，從生理學上講，哺乳動物可能不得不早期就在利用能量，或保留心臟的再生能力之間做出選擇。“選擇是明確的。相比于身體里任何的器官，心臟更需要利用能量來確保終身泵血。”心肌中的線粒體量為全身zui高，在休息狀態時都要消耗身體30%的總氧量。不幸的是...

如何解決細胞系培養板的密閉和污染問題

細胞系培養板的加樣和操作：細胞培養板在進行細胞操作時同樣遵循嚴格無菌的原則，各項操作要保證規范、科學，不對細胞的生長造成額外的影響。這其中zui常見的問題就是如何保證加樣后細胞的均勻和盡量減少換液對細胞生長狀態的影響。1.蓋子很松，屬于半開放培養，這樣的目的是透氣（實際上是為了使培養皿外的co2能夠與培養皿充分交換，維持培養基的pH值）。2.凡事有利必有弊，這樣當然增加了污染的可能性。此外這樣還會使培養皿內的液體蒸發，這對于定量的藥物來說就顯得值得注意了。所以以下二條措施是必...

原代細胞生長的檢查方法

原代細胞是zui簡單的檢測細胞生長的方法。計數細胞一般利用臺盼藍(錐蟲藍染色，臺盼藍(錐蟲藍)不能透過活細胞正常完整的細胞膜，故活細胞不著色。而死亡細胞的細胞膜通透性增高，可使染料進入細胞內而使細胞著色。因此，鏡下未染色細胞認為是活細胞，而染色細胞認為是死亡細胞。經典的細胞計數常用到血細胞計數板。細胞消化成單個細胞后，將細胞懸液加入血蓋片和計數板之間的空隙中，通常我們計數計數板的四角大方格(每個大方格又分16個小方格)內的細胞數。計完數后，需換算出每ml懸液中的細胞數。由于計...

原代細胞或可調節血管口徑和通透性

原代細胞在酶的作用下，由它再進一步生成一組旁分泌激素物質，如血栓素和前列腺素等，這類物質對調節血管口徑和通透性有明顯的作用，還能引起炎癥反應和疼痛，并影響血液凝固。中性粒細胞內含許多彌散分布的細小的淺紅或淺紫色的*顆粒，顆粒中含有髓過氧化物酶、酸性磷酸酶、吞噬素、溶菌酶等。髓過氧化物酶是中性粒細胞所*，即使在有強吞噬作用的巨噬細胞中也極少或*沒有這種酶。在細胞化學上，一般將這種髓過氧化物酶作為中性粒細胞的標志。中性粒細胞具有很強的趨化作用。所謂趨化作用，就是細胞向著某一化學物...

原代細胞活力評估難度低

傳統的原代細胞培養主要是通過顯微鏡下形態學變化以及傳代培養周期的變化預估細胞生長生存狀態。這種主觀判斷既無法量化，也無法進行統計學分析。因此，目前對細胞存活質量的判斷并沒有準確、客觀的統一標準，并且對體外培養細胞的存活質量控制往往被科研工作者們“忽略”，從而導致實驗結果的不穩定。體外細胞的有效培養新概念——“細胞質控”。通過細胞活力、細胞凋亡、細胞周期、細胞增殖及DNA損傷五方面對細胞生長生存狀態進行的監控。在這五個方面中，影響zui大的便是細胞活力，下面咱們專門來談一談細胞...