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腫瘤細胞培養無菌操作步驟

腫瘤細胞培養操作步驟：1.打開無菌工作臺及凈化室的紫外燈，消毒半小時以上。2.進入凈化室前先關閉紫外燈，打開超凈臺風機，等待30min以上，以排盡臭氧。3.穿好隔離衣，戴好口罩，帽子。4.風淋2分鐘。5.0.1%過氧乙酸水泡手，擦干。6.點燃酒精燈;超凈臺內應避免放入過多的物品;使用的吸管，滴管，試管，培養瓶等均事先滅菌。7.打開各類瓶蓋前先過火，以固定灰塵;打開的瓶口、試管口過火焰，鑷子使用前應經火焰燒灼。8.水平式風機的超凈臺，應使瓶口斜置，應盡量避免瓶口敞開直立。9.同...

如何進行人表皮角質形成細胞的傳代培養

1如何進行人表皮角質形成原代細胞的傳代培養？問＆答-------------------------------------------皮膚不但是人體的生理屏障，而且在機體免疫和內分泌等方面起著極其重要的作用。角質形成細胞是表皮細胞的主要組成部分，角質形成細胞的體外培養可為皮膚毒理學、燒傷治療學、美容學和皮膚病發病機制的研究提供新的途徑。那么該如何進行人表皮角質形成細胞的傳代培養？1.達到60%～75%的融合后，移去培養基，單層細胞使用10ml1：5000乙二胺四乙酸(Ver...

原代細胞因子溶解操作方法及注意事項

原代細胞所供應的PeproTech細胞因子中不含載體蛋白（CarrierProtein）或其他添加劑（如BSA、HAS或蔗糖等），并且通常以zui少量的鹽來進行凍干處理，因此微量的細胞因子在凍干過程中會沉積于管內，形成很薄或不可見的蛋白層。所以我們建議在收到產品后，務必在開蓋前先離心，使粘在管蓋或管壁上的蛋白聚集于管底（此時能否見到白色沉淀均屬正?，F象）。1．離心：高速離心(10,000rpm)20-30秒，或低速離心(2,000rpm)5分鐘。2．溶解（Reconstitu...

細胞的凍存與復蘇

為了防止原代細胞因污染或技術原因使長期培養功虧一簣，考慮到培養細胞因傳代而遲早會出現變異，有時因寄贈、交換和購買，培養細胞從一個實驗室轉運到另一個實驗室，*的策略是進行低溫保存。這對于維持一些特殊細胞株的遺傳特性極為重要?，F簡要介紹深低溫保存法(－70℃~－196℃)的特點。細胞深低溫保存的基本原理是：在－70℃以下時，細胞內的酶活性均己停止，即代謝處于*停止狀態，故可以長期保存。細胞低溫保存的關鍵，在于通過0~20℃階段的處理過程。在此溫度范圍內，水晶呈針狀，極易招致細胞的...

細胞的原代和傳代培養

一、原代細胞培養(一)原理細胞培養(Cellculture)是模擬機體內生理條件，將細胞從機體中取出，在人工條件下使其生存、生長、繁殖和傳代，進行細胞生命過程、細胞癌變、細胞工程等問題的研究。近年來，廣泛地應用于分子生物學、遺傳學、免疫學、腫瘤學、細胞工程等領域，發展成一種重要生物技術，并取得顯著成就。由體內直接取出組織或細胞進行培養叫原代培養。原代培養細胞離體時間短，性狀與體內相似，適用于研究。一般說來，幼稚狀態的組織和細胞，如：動物的胚胎、幼仔的臟器等更容易進行原代培養。...

干細胞老化的表現，怎么預防呢？

腫瘤細胞在培養過程中如果環境不適合其生長就會出現部分細胞的老化現象。這是干細胞培養的一個難點也是經常出現的問題。本文描述干細胞老化時出現的跡象，以及其預防措施。干細胞老化的表現★細胞胞漿內特別是在核區附近出現黑色顆粒，表示細胞開始出現老化；★細胞胞漿內出現空泡，則表明該細胞已老化或者已經開始分化（在全部細胞中出現少數老化細胞是正常的）；★細胞立體感逐漸消失，細胞間的間隔不清，部分細胞扁平狀，細胞的形狀趨向多樣；★貼壁性減退，出現一些漂浮的細胞；部分分泌強的細胞分泌物增多，細胞...

細胞株臨床安全標準

細胞株臨床應用安全標準日本厚生勞動省日前制定了一份干細胞臨床應用安全標準，要求對誘導多功能干細胞（iPS細胞）和胚胎干細胞用于臨床治療和研究，進行一系列安全性審查。在2014年起實施的日本《再生醫療安全性確保法》中，使用iPS細胞和胚胎干細胞的治療和研究被劃分為危險性zui高的“*類”，在實施相關治療和研究時，研究人員需要接受一個專門委員會的審查。但由于沒有關于這些干細胞安全性的具體標準，審查可能出現混亂。根據制定的安全標準，在利用細胞株等培養用于移植的細胞時，研究人員需要調...

細胞衰老的原因

腫瘤細胞概括起來主要有差錯學派（Errortheories）和遺傳學派（Genetic/Programmedtheories）兩大類,前者強調衰老是由于細胞中的各種錯誤積累引起的,后者強調衰老是遺傳決定的自然演進過程.其實,現在看來兩者是相互統一的。（一）差錯學派細胞衰老是各種細胞成分在受到內外環境的損傷作用后,因缺乏完善的修復,使“差錯”積累,導致細胞衰老.根據對導致“差錯”的主要因子和主導因子的認識不同,可分為不同的學說,這些學說各有實驗證據。1．代謝廢物積累（waste...