細胞簡介：

產品名稱 大鼠小梁網細胞

組織來源 眼球

產品規格 5×10^5Cells/T25

細胞簡介 大鼠小梁網細胞分離自眼球組織；小梁網由角膜基質纖維、后界膜和角膜內皮向后擴展而成，覆蓋在鞏膜靜脈竇的內側。小梁網細胞在眼內壓調節中起著關鍵作用；小梁網細胞內有特定的神經遞質和神經肽受體，其中包括腎上腺素、乙酰和神經肽Y。青光眼是由于眼內壓力升高而造成的一種不可逆致盲眼病，小梁網細胞的體外培養是青光眼病因學研究的重要手段之一。在小梁網細胞中，一長串的血管活性多肽和生長因子能夠觸發細胞內信號傳導機制，小梁網細胞可合成不同類型的細胞外基質蛋白以及金屬。形態學觀察可見，剛從組織塊長出的原代細胞，形態各異，多數呈星狀或不規則形。細胞有胞突，核橢圓形，胞體肥大，胞漿豐富，且可見吞噬顆粒。隨著細胞的增生及相互融合為單層，細胞的形態趨于一致。胞漿的色素顆粒及胞突消失，排列緊密呈類似上皮細胞的扁橢圓形或不規則形。胞體透亮，包膜清晰。

方法簡介 實驗室分離的大鼠小梁網細胞采用組織貼塊法制備而來，細胞總量約為5×10? cells/瓶。

質量檢測 實驗室分離的大鼠小梁網細胞經NSE（神經元特異性烯醇化酶）免疫熒光鑒定，純度可達90%以上，且不含有HIV-1、HBV、HCV、支原體、細菌、酵母和真菌等。

產品信息：

培養信息：

自備試劑： 0.25%  、PBS  、培養基

培養基： 大鼠小梁網細胞 培養基(含FBS、生長添加劑、Penicillin、Streptomycin等)

換液頻率： 每2-3天換液一次

生長特性： 貼壁

細胞形態： 梭形、多角形

傳代比例： 1:2

傳代特性： 可傳2-3代

消化液：0.25%

凍存步驟：

凍存前準備?

確保細胞處于對數生長期，密度達80%-90%?。

配制凍存液：推薦50%基礎培養基+40%FBS+10%DMSO?。

?細胞處理?

棄去培養上清，用PBS潤洗1-2次?。

加入消化后，用含血清的培養基終止消化。

?凍存操作?

離心（1000RPM，3-4分鐘）后棄上清，用凍存液重懸細胞?。

分裝至凍存管（每管1mL，細胞數100-400萬）?。

4℃靜置10分鐘，-20℃ 2小時，-80℃過夜后轉入液氮?。

公司正在出售的產品：

操作實驗步驟：

1. 原代細胞分離

?組織獲取?：采用成年SD大鼠，快速取出海馬或脊髓組織，置于低溫人工腦脊液（0-4℃）中保存?。

?消化與離心?：使用木瓜蛋白酶消化組織，通過Optiprep不連續梯度離心，收集組織細胞密集帶?。

?細胞培養?：將細胞懸液接種于含B27添加劑和堿性成纖維細胞生長因子2（FGF-2）的培養基中，置于37℃、5% CO2孵箱中培養?。

2. 細胞純化

?差速貼壁法?：通過搖床分離（200r/min去除小膠質細胞，280r/min收集少突前體細胞）?。

?免疫磁珠分選?：利用NG2抗體標記后通過磁珠分選，提高純度?。

3. 細胞傳代與凍存

?傳代?：使用含EDTA和DNase I的消化液處理細胞，按1:3比例傳代?。

?凍存?：將細胞重懸于凍存液（含10% DMSO和90%胎牛血清），程序降溫后保存于液氮中?。

4. 功能驗證

?免疫熒光染色?：檢測NG2、GFAP等標志物表達，確認細胞純度?。

?電生理記錄?：通過膜片鉗技術檢測細胞電特性（如鈉電流）。