細胞簡介：

產品名稱 大鼠小腦顆粒細胞

組織來源 腦組織

產品規格 5×10^5Cells/T25

細胞簡介 大鼠小腦顆粒細胞分離自小腦皮層組織；神經元是神經系統基本的結構與功能單位，小腦顆粒神經元是體積較小的神經元，直徑約10 μm，在中樞神經系統中含量非常豐富，近乎神經元數量的一半。由于小腦神經元的生長、分化和大腦皮層神經元相似，而且數量多、便于取材，因此小腦顆粒神經元是研究神經元生長發育、神經軸突再生及神經疾病發生機制和臨床神經藥理的重要手段。小腦顆粒神經元是小腦主要的中間神經元，在哺乳動物的小腦內數量為豐富。顆粒神經元的軸突與苔狀纖維和爬行纖維相聯系，形成小腦皮層內的神經元環路，在小腦的神經活動中起著非常重要的作用。在動物傳染性海綿狀腦病中，病變可波及小腦顆粒神經元，導致小腦皮層的神經元環路受損，從而呈現神經性行為失調。研究小腦顆粒神經元在動物傳染性海綿狀腦病病理學變化中的反應、病理發生的機理特別是分子機理，有賴于小腦顆粒神經元細胞模型的建立。小腦顆粒細胞的軸突是沿冠狀軸分布的平行纖維，正是這種排列保證了興奮的單向傳導，這是小腦功能理論中的關鍵假設，小腦顆粒細胞通過g-氨基丁酸接受戈爾吉細胞的抑制性突觸的信息傳入。

方法簡介 實驗室分離的大鼠小腦顆粒細胞采用消化法結合神經元專用培養基、化學試劑抑制法篩選制備而來，細胞總量約為5×10? cells/瓶。

質量檢測 實驗室分離的大鼠小腦顆粒細胞經NSE免疫熒光鑒定，純度可達90%以上，且不含有HIV-1、HBV、HCV、支原體、細菌、酵母和真菌等。

產品信息：

培養信息：

自備試劑： 0.25%  、 多聚-L-賴溶液（1×）或多聚-L-賴溶液（10×）  、PBS  、培養基

包被條件： PLL（0.1 mg/mL）

培養基： 大鼠小腦顆粒細胞培養基(含B-27、Penicillin、Streptomycin等)

換液頻率： 每2-3天換液一次

生長特性： 貼壁

細胞形態： 神經元細胞樣

傳代比例： 不傳代

傳代特性： 屬于終末分化細胞；屬于不增殖細胞群

消化液：0.25%

凍存步驟：

凍存前準備?

確保細胞處于對數生長期，密度達80%-90%?。

配制凍存液：推薦50%基礎培養基+40%FBS+10%DMSO?。

?細胞處理?

棄去培養上清，用PBS潤洗1-2次?。

加入消化后，用含血清的培養基終止消化。

?凍存操作?

離心（1000RPM，3-4分鐘）后棄上清，用凍存液重懸細胞?。

分裝至凍存管（每管1mL，細胞數100-400萬）?。

4℃靜置10分鐘，-20℃ 2小時，-80℃過夜后轉入液氮?。

公司正在出售的產品：

操作實驗步驟：

1. 原代細胞分離

?組織獲取?：采用成年SD大鼠，快速取出海馬或脊髓組織，置于低溫人工腦脊液（0-4℃）中保存?。

?消化與離心?：使用木瓜蛋白酶消化組織，通過Optiprep不連續梯度離心，收集組織細胞密集帶?。

?細胞培養?：將細胞懸液接種于含B27添加劑和堿性成纖維細胞生長因子2（FGF-2）的培養基中，置于37℃、5% CO2孵箱中培養?。

2. 細胞純化

?差速貼壁法?：通過搖床分離（200r/min去除小膠質細胞，280r/min收集少突前體細胞）?。

?免疫磁珠分選?：利用NG2抗體標記后通過磁珠分選，提高純度?。

3. 細胞傳代與凍存

?傳代?：使用含EDTA和DNase I的消化液處理細胞，按1:3比例傳代?。

?凍存?：將細胞重懸于凍存液（含10% DMSO和90%胎牛血清），程序降溫后保存于液氮中?。

4. 功能驗證

?免疫熒光染色?：檢測NG2、GFAP等標志物表達，確認細胞純度?。

?電生理記錄?：通過膜片鉗技術檢測細胞電特性（如鈉電流）。