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原代細(xì)胞培養(yǎng)中不要使用抗生素的原因

原代細(xì)胞由于過濾技術(shù)的提高和超凈臺(tái)質(zhì)量的改進(jìn)，在規(guī)范的細(xì)胞培養(yǎng)操作過程中引進(jìn)污染的機(jī)會(huì)已經(jīng)被大大降低了。所以比較合理的建議是，在常規(guī)的細(xì)胞培養(yǎng)中不要使用抗生素。只有在培養(yǎng)污染源很多（比如組織培養(yǎng)），或者培養(yǎng)非常珍貴的細(xì)胞株時(shí)才使用抗生素。抗生素雖然減少了可以觀察到的細(xì)菌、酵母等微生物的污染機(jī)會(huì)，卻會(huì)增加支原體、病毒等隱性污染的機(jī)會(huì)。因?yàn)榧?xì)胞培養(yǎng)中污染主要來源于空氣中的微粒和汽霧，而這些微粒和汽霧可以同時(shí)攜帶支原體、病毒和其他微生物。當(dāng)抗生素使用時(shí)，可見污染被抑制而隱性污染又沒...

原代細(xì)胞培養(yǎng)的起源

原代細(xì)胞是在標(biāo)準(zhǔn)條件下用有限或連續(xù)細(xì)胞系開展工作的.所以,考慮培養(yǎng)物中的細(xì)胞成分非常重要.如細(xì)胞在誘導(dǎo)條件下表現(xiàn)分化特征,要么意味著培養(yǎng)的細(xì)胞是成熟的,保持其持續(xù)合成特殊蛋白質(zhì)的能力就夠了;要么意味著培養(yǎng)細(xì)胞由前體細(xì)胞或干細(xì)胞組成,這些細(xì)胞有增殖能力,美工維持未分化狀態(tài),當(dāng)有了合適的誘導(dǎo)條件,其中的一些或全部細(xì)胞會(huì)成熟并分化.有指導(dǎo)意義的考慮是,把培養(yǎng)物看成是由多能干細(xì)胞,未分化的定向前體細(xì)胞和成熟細(xì)胞組成的平衡狀態(tài),并且,這種平衡可隨環(huán)境條件變化而改變.在細(xì)胞密度較低的情況...

原代細(xì)胞新打印技術(shù)存活率高

研究人員開發(fā)出一種可將原代細(xì)胞打印到任何表面和幾乎任何形狀上的技術(shù)，且整個(gè)過程中幾乎所有的細(xì)胞仍能存活。新技術(shù)猶如中國古代木刻版印刷術(shù)和現(xiàn)在兒童橡皮印章玩具，與噴墨打印方法有所不同。這種方法在短短半個(gè)小時(shí)內(nèi)可產(chǎn)生2D細(xì)胞陣列，打印出的細(xì)胞緊密到接近5微米（大多數(shù)動(dòng)物細(xì)胞在10到30微米寬），并允許使用許多不同類型的細(xì)胞。研究人員將這種技術(shù)命名為批量細(xì)胞打?。˙loC打?。?。噴墨打印方法打印二維和三維細(xì)胞已基本成功，但有時(shí)只有一半細(xì)胞在打印過程中存活。秦立冬說：“基于噴墨的細(xì)胞...

原代細(xì)胞分析之全攻略

原代細(xì)胞轉(zhuǎn)錄組學(xué)和蛋白質(zhì)組學(xué)NanoStringTechnologies的科學(xué)家發(fā)現(xiàn)，細(xì)胞群體的RNA平均表達(dá)水平不一定與群體中單個(gè)細(xì)胞的RNA表達(dá)相同。例如，有些基因持續(xù)在低水平表達(dá)，而另一些則在短時(shí)間內(nèi)大量表達(dá)。對宏觀測定而言，這樣的表達(dá)模式被平均化。該公司*的數(shù)字表達(dá)譜分析系統(tǒng)能直接對單個(gè)RNA分析進(jìn)行計(jì)數(shù)，zui多可分析單細(xì)胞中的800個(gè)不同分子。這是利用nCounterSingleCellGeneExpressionAssay中的分子條形碼來實(shí)現(xiàn)的，它識別特定的RN...

避免污染的原代細(xì)胞培養(yǎng)方法

培養(yǎng)原代細(xì)胞常規(guī)方法需用二氧化碳溫箱，且為保持箱內(nèi)二氧化碳?xì)?%～10%的濃度，需持續(xù)輸入二氧化碳?xì)怏w。為此，箱內(nèi)的培養(yǎng)瓶蓋不能擰緊以便二氧化碳?xì)怏w自由進(jìn)出。*步，配制1L培養(yǎng)液。培養(yǎng)基中含有酚紅指示劑，偏堿時(shí)液體為深紅或紫色，偏酸時(shí)則呈黃色。取配1L培養(yǎng)液的粉劑培養(yǎng)基，加入750ml三蒸水或去離子水，搖勻(一般培養(yǎng)液呈橘紅色)；再加入碳酸氫鈉1～1．1g，至*溶解(呈深紅色)；zui后再加三蒸水或去離子水至1L止。第二步，插吸管于配好的培養(yǎng)液內(nèi)，通入二氧化碳?xì)怏w。隨著二氧化...

原代細(xì)胞被支原體污染的危害

為什么有些原代細(xì)胞實(shí)驗(yàn)無法重復(fù)？為什么有的細(xì)胞在相當(dāng)長的時(shí)間里，都養(yǎng)不到好的狀態(tài)？為什么實(shí)驗(yàn)室中，超過一株以上的細(xì)胞都時(shí)好時(shí)壞？細(xì)胞生長緩慢、細(xì)胞變形、碎片增加、懸浮細(xì)胞容易成團(tuán)、培養(yǎng)基提前變色、鏡下發(fā)現(xiàn)有小黑點(diǎn)……如果排除了其他試劑選擇不當(dāng)、細(xì)胞株老化、細(xì)菌污染等原因，而仍有上述一種或幾種情況，則高度提示——你的細(xì)胞可能被支原體污染了！支原體污染普遍存在據(jù)美國數(shù)據(jù)統(tǒng)計(jì)，細(xì)胞發(fā)生支原體污染的幾率在70%以上。同時(shí)，由于支原體直徑很小，僅在180nm~350nm之間，只有通過電...

細(xì)胞株污染的清除

培養(yǎng)細(xì)胞株一經(jīng)污染，多數(shù)較難處理。如果污染細(xì)胞價(jià)值不大，宜棄之;在尋找原因后*消毒操作室，復(fù)蘇或重新購置細(xì)胞，再培養(yǎng)。若污染細(xì)胞價(jià)值較大，又難于重新得到，可采取以下辦法清除。一、細(xì)菌和真菌的清除1、使用抗生素抗生素對殺滅細(xì)菌較有效。聯(lián)合用藥比單獨(dú)用藥效果好。預(yù)防用藥比污染后再用藥效果好。預(yù)防用藥一般用雙抗生素，污染后清除用藥需采用大于常用量5～10倍的沖洗法，于加藥后作用24～48小時(shí)，再換常規(guī)培養(yǎng)液。此法在污染早期有效。二、支原體的清除1、用MRA處理用MRA(Mycopl...

細(xì)胞株增殖實(shí)驗(yàn)服務(wù)

細(xì)胞株增殖是生物體生長、發(fā)育、繁殖、遺傳的基礎(chǔ)，是細(xì)胞zui基本的生理活動(dòng)。生長因子、激素及癌基因產(chǎn)物等均可誘導(dǎo)細(xì)胞的增殖或抑制細(xì)胞的增殖，通過影響細(xì)胞周期、誘導(dǎo)細(xì)胞凋亡而實(shí)現(xiàn)。MTT檢測細(xì)胞增殖MTT全稱為3-(4,5)-dimethylthiahiazo(-z-y1)-3,5-di-phenytetrazoliumromide。MTT比色法是常用的檢測細(xì)胞存活和生長的方法之一，其檢測原理為活細(xì)胞線粒體中的琥珀酸脫氫酶能使外源性MTT還原為水不溶性的藍(lán)紫色結(jié)晶甲瓚并沉積在細(xì)...