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技術文章

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  • 20185-29
    細胞株狀態不好的解決方法

    細胞株是生物體形態結構和生命活動的基本單位。通常認為細胞是人體的zui小單位,它是由許多更小的具有自身功能的結構組成。盡管人類細胞大小不等,但所有的細胞均很小。即使是zui大的細胞如受精卵,也是肉眼所不能見到的。細胞狀態不好,可能是血清中有黑膠蟲。解決方法如下:1.換好一點的血清。2.用無菌的PBS洗幾次,可一定程度上緩解。注意好實驗環境要,保持細胞間整個環境的潔凈度。3.換用進口的一次性塑料培養瓶。4.建議清理無菌室所有物品,重新滅菌,用KMnO4熏蒸,按使用無菌室做,細胞...

  • 20185-24
    原代細胞試探性的開端

    研究人員成功培養出來自小鼠胚胎的原代細胞。他們很快意識到這項發現的巨大潛力,因為這些細胞既能自我復制,又可被推動變成身體200余種細胞類型中的任何一種。不過,此項技術并不容易在靈長類動物身上實現。威斯康辛大學麥迪遜分校生物學家JamesThomson花了14年時間,才將該技術成功用于猴子。3年后,Thomson利用生育治療中未使用的捐贈胚胎,創建了人類ES細胞系。此項發現激起了一場道德風暴。批評者——大多數來自宗教界——認為胚胎構成了人類的一部分,并且想阻止任何涉及破壞胚胎的...

  • 20185-22
    細胞株的形態學觀察和檢定

    細胞株的形態學觀察及鑒定:細胞換液后直接在倒置顯微鏡下觀察細胞的形態及生長特征,并作相差攝影,同時進行常規HE染色觀察并攝片。鑒定采用DAB免疫組織化學法,在6孔培養板中放置載玻片,在玻片上植入2ml含有1×106的細胞懸液,待細胞貼壁后,取出載玻片,放入-20℃的冷丙酮中固定30min,用PBS沖洗3次,每次2min,滴加3%H2O2室溫孵育10min,PBS沖洗3次,每次2min,以消除內源性過氧化物酶的活性。滴加兔抗人Ⅷ因子相關抗原多抗工作液,放入濕盒內4℃過夜,同時另...

  • 20185-17
    腫瘤細胞如何進行傳代?

    腫瘤細胞是科研實驗中常用到的細胞,當人臍靜脈內皮細胞達到90%融合時,需要對細胞進行傳代培養。首先培養瓶的準備:用纖維粘連蛋白(BPF,貨號#8248)包被培養瓶,包被濃度為2ug/cm2,包被時間為4度過夜或37度一小時。將培養基(ECM,貨號#1001)、胰酶/EDTA消化液(T/S,貨號#0103)、胰酶中和液(TNS,貨號#0113)和無鈣鎂離子的磷酸鹽緩沖液(DPBS,貨號#0303),溫度回復至室溫,我們不推薦用37°C水浴加熱試劑和培養基。棄去原培養瓶中培養基,...

  • 20185-15
    原代細胞因子中全血的標本處理方法

    原代細胞因子中全血的標本處理方法分析:我們針對全血:使用肝素鈉抗凝的真空采血管采血,不易采用肝素鋰、EDTA和ACD抗凝劑,血樣在8小時內分析,超過8小時會導致活性的損失,一般細胞因子陽性細胞會減少5%。如不能在8小時之內檢測,應將真空采血管水平室溫放置。自身血漿中外周血單個核細胞(PBMCs):使用肝素鈉抗凝的采血后,分離PBMCs,24小時內分析。組織培養基中的外周血單個核細胞(PBMCs):用Ficoll分離PBMCs,將細胞重懸于含10%熱滅活胎牛血清(FBS)的RP...

  • 20185-10
    細胞系如何分配任務并解決問題

    從生物學角度了解不同類型細胞系如何一起工作是一個極大的未知數。例如,我們不知道大腦中每種細胞的數量,甚至連腦細胞的類型都還處于持續爭論狀態。一個恰當的理論框架,可以集中所有的實驗數據和觀點,共同用于理解生物的復雜性。1950s,人們開發了信息理論,用于研究如何用有效的方式發送信息,減少錯誤。這個理論也與大腦神經元的相互交流有關。Sharpee利用信息學理論識別支配生物復雜性的基本定律,用它來預測系統內總共有多少種細胞,以及這些細胞應該如何協作。2015年,研究人員們將他們的這...

  • 20185-8
    細胞株計數的難題與解決方案

    細胞株和病毒的放大培養面臨挑戰。當需要量增加千倍時,細胞培養瓶對于工業規模是不可行的。微載體為生物反應器中貼壁細胞的生長提供了方便,微載體充當貼壁細胞可附著的支架,允許它們增殖,而生物反應器使細胞-微載體復合體自由懸浮在培養基中。因此,貼壁細胞也可以像懸浮細胞那樣生長,從而簡化了放大培養,并允許利用現有的資源用于過程優化和。傳統方法的微載體的細胞計數耗時耗力,且計數結果不準確,需要離心樣品、PBS重懸、胰蛋白酶消化細胞和臺盼藍或者結晶紫染色等多個步驟來計數在微載體上生長的細胞...

  • 20184-26
    原代細胞實驗室檢測方法

    原代細胞實驗室檢測(一)包涵體的檢測。1.血片及白細胞涂片制備采集的抗凝血標本盡快用血球層推血片,待干燥后冷丙酮固定10min;或提取抗凝血中的白細胞并進行涂片,待干燥后冷丙酮固定10min。2.染色通常采用瑞氏(Wright)染色法、姬氏(Giemsa)染色法及瑞-姬混合染色法。有條件的實驗室,可使用美國CDC推薦的染色方法。3.染液配置方法(1)瑞-姬染液:取瑞氏染料和姬氏染料各0.5g,以甲醇研溶,加甲醇500ml保存,每天搖勻1次,1周后可使用。(2)改良McDona...

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