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構(gòu)建人類原始原代細(xì)胞

這是*次成功將人類原代細(xì)胞編程至這樣的早期發(fā)育階段。這項(xiàng)研究有可能幫助找到有關(guān)一些生育問(wèn)題病因的答案，生成關(guān)于胚胎發(fā)育zui早期的一些新見解，并有潛力在未來(lái)促使開發(fā)出新型的生殖技術(shù)。多年來(lái)研究人員一直試圖在培養(yǎng)皿中構(gòu)建出人類原始生殖細(xì)胞。原始生殖細(xì)胞生成于胚胎發(fā)育的zui初幾個(gè)星期里，此時(shí)受精卵中的胚胎干細(xì)胞開始分化為這一非常基礎(chǔ)的細(xì)胞類型。一旦這些原始生殖細(xì)胞變?yōu)椤鼗?xì)胞，它們會(huì)‘幾乎自發(fā)’地繼續(xù)朝著精子或卵子前體細(xì)胞發(fā)育。誘導(dǎo)多能干(iPS)細(xì)胞的誕生促使科學(xué)家們提出...

腫瘤細(xì)胞培養(yǎng)成纖維細(xì)胞排除法

腫瘤細(xì)胞刮除法：是用不銹鋼絲末端插有橡膠刮頭（用膠塞剪成三角形插以不銹鋼絲）、或裹少許脫脂棉制成，裝入試管中高壓滅菌后備用（也可用特制電熱燒灼器刮除）。刮除程序?yàn)椋海?）標(biāo)記：鏡下觀察，用不脫色筆在培養(yǎng)瓶皿的背面圈下生長(zhǎng)腫瘤細(xì)胞的部位；（2）刮除：棄掉培養(yǎng)液，把無(wú)菌膠刮伸入瓶皿中，肉眼或顯微鏡窺視下，刮除無(wú)標(biāo)記空間；（3）用Hanks液沖洗一兩次，洗除被刮掉的細(xì)胞；（4）注入培養(yǎng)液繼續(xù)培養(yǎng)，如發(fā)現(xiàn)仍有成纖維細(xì)胞殘留，可重復(fù)刮除至*除掉為止2．反復(fù)貼壁法：根據(jù)腫瘤細(xì)胞比成纖維細(xì)...

正確復(fù)蘇原代細(xì)胞的方法

原代細(xì)胞凍存好了，接下來(lái)要注意什么問(wèn)題呢?沒(méi)錯(cuò)，就是記得到時(shí)間了，拿出來(lái)復(fù)蘇。那么，細(xì)胞復(fù)蘇的過(guò)程中又有哪些該注意的事項(xiàng)呢?細(xì)胞活力和形態(tài)檢查的作用何在?請(qǐng)看下文：活力檢查–千萬(wàn)不要使用不健康的細(xì)胞，可能有污染，如果發(fā)現(xiàn)有污染毫不猶豫的丟棄!形態(tài)檢查–檢查細(xì)胞的固有形態(tài)和生長(zhǎng)行為。凍存細(xì)胞：補(bǔ)充新的培養(yǎng)液–在您開始凍存細(xì)胞的前一天補(bǔ)充新的培養(yǎng)液。在細(xì)胞長(zhǎng)至70%單層時(shí)收獲細(xì)胞，計(jì)數(shù)活細(xì)胞數(shù)，用凍存液調(diào)整細(xì)胞密度~5x106cells/ml(根據(jù)不同的細(xì)胞類型調(diào)整)凍存液–用凍...

如何使細(xì)胞培養(yǎng)物快速適應(yīng)無(wú)血清培養(yǎng)基？

許多原代細(xì)胞系容易適應(yīng)無(wú)血清培養(yǎng)基和無(wú)蛋白培養(yǎng)基，而對(duì)環(huán)境要求過(guò)高的其它細(xì)胞卻難以適應(yīng)變化，這就需要更為專業(yè)的方法來(lái)適應(yīng)變化。而根據(jù)細(xì)胞系的特性，有兩種方法可使細(xì)胞適應(yīng)無(wú)血清培養(yǎng)基。*種方法是連續(xù)適應(yīng)/循序隔絕法；另一種方法是直接適應(yīng)。一、連續(xù)適應(yīng)/循序隔絕法*種方法是連續(xù)適應(yīng)/循序隔絕法。通過(guò)一系列的血清還原步驟，使細(xì)胞適應(yīng)無(wú)血清培養(yǎng)基。這是優(yōu)先選用的方法，且不對(duì)細(xì)胞培養(yǎng)環(huán)境形成太過(guò)惡劣的變化。連續(xù)適應(yīng)/循序隔絕法——方法1使原培養(yǎng)基內(nèi)的細(xì)胞連續(xù)地經(jīng)過(guò)以下幾個(gè)階段：階段1：...

兔食管上皮細(xì)胞培養(yǎng)步驟

原代細(xì)胞實(shí)驗(yàn)材料：1.大兔的正常食管組織2.6孔培養(yǎng)板：用多聚賴氨酸4℃包被過(guò)夜3.不含Ca2+和Mg2+的1×PBS，添加200000IU/L青霉素、200mg/L鏈霉素和200000U/L慶大霉素，pH7.44.手術(shù)刀、解剖剪、解剖鑷、眼科剪，眼科鑷實(shí)驗(yàn)方法：1.處死大兔，取正常食管組織放入含雙抗的PBS（pH=7.2）中反復(fù)清洗3次，以洗去組織表面的血絲及粘液；2.小心的用眼科剪鑷將食管黏膜與黏膜下組織分離；3.分離出的粘膜組織用含雙抗的PBS（pH=7.2）反復(fù)沖洗若...

腫瘤細(xì)胞培養(yǎng)方法

腫瘤細(xì)胞培養(yǎng)成功關(guān)鍵在于：取材、成纖維細(xì)胞的排除、選用適宜的培養(yǎng)液和培養(yǎng)底物等幾個(gè)方面。在具體培養(yǎng)方法方面，腫瘤細(xì)胞培養(yǎng)與正常組織細(xì)胞培養(yǎng)并無(wú)原則差別，初代培養(yǎng)應(yīng)用組織塊和消化培養(yǎng)法均可。1、取材：人腫瘤細(xì)胞來(lái)自外科手術(shù)或活檢瘤組織。取材部位非常重要，體積較大的腫瘤組織中有退變或壞死區(qū)，取材時(shí)盡量避免用退變組織，要挑選活力較好的部位。癌性轉(zhuǎn)移淋巴結(jié)或胸腹水是好的培養(yǎng)材料。取材后宜盡快進(jìn)行培養(yǎng)，如因故不能立即培養(yǎng)，可貯存于4℃中，但不宜栽過(guò)24小時(shí)。2、培養(yǎng)基：腫瘤細(xì)胞對(duì)培養(yǎng)基...

應(yīng)用細(xì)胞融合技術(shù)制備染色體

原代細(xì)胞實(shí)驗(yàn)?zāi)康耐ㄟ^(guò)細(xì)胞融合技術(shù)，初步了解染色體提前凝集標(biāo)本制備原理、方法及間期細(xì)胞三種時(shí)相的提前凝集染色體特點(diǎn)。【實(shí)驗(yàn)用品】一、材料人宮頸癌上皮細(xì)胞(HeLa細(xì)胞)二、器材和儀器顯微鏡、離心機(jī)、水浴箱、熱吹風(fēng)機(jī)、10ml刻度離心管、5(1/2)針頭注射器、試管架、染色槽、廢液缸、吸水紙、擦鏡紙、冰凍載玻片、香柏油瓶、記號(hào)筆、酒精燈。三、試劑50％PEG、Hanks液(pH7.4)、RPMI一1640培養(yǎng)基(含10％滅活小牛血清，pH7.4)10μg／ml秋水仙素，0.075...

細(xì)胞培養(yǎng)過(guò)程中添加劑起到的作用

腫瘤細(xì)胞能量來(lái)源：谷氨酰胺L－谷氨酰胺是一種氨基酸，細(xì)胞的重要能量來(lái)源、參與蛋白質(zhì)的合成和核酸代謝。同時(shí)L-谷氨酰胺不穩(wěn)定，在中性的水溶液中會(huì)自發(fā)降解；降解產(chǎn)物對(duì)細(xì)胞有毒性（對(duì)干細(xì)胞，原代細(xì)胞影響尤其大）。能影響細(xì)胞活性、蛋白表達(dá)水平及糖基化模式等。那如何解決呢？方案有二：?選擇不含谷氨酰胺的培養(yǎng)基，自己添加?選擇穩(wěn)定的谷氨酰胺替代物經(jīng)過(guò)科學(xué)家不斷努力，終于找到了穩(wěn)定的谷氨酰胺替代物：glutaGRO。它有何方功能呢？原來(lái)，它是由L-丙氨酸和L-谷氨酰胺縮合形成的二肽，穩(wěn)定性...