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詳解腫瘤細(xì)胞侵襲實(shí)驗(yàn)步驟

腫瘤細(xì)胞侵襲能力檢測(cè)在腫瘤學(xué)（遷移、侵襲）和免疫學(xué)（遷移、趨化）中是常規(guī)實(shí)驗(yàn)。1.侵襲是細(xì)胞遷移的一種。細(xì)胞遷移分三種類型：趨觸、趨化和侵襲。2.腫瘤細(xì)胞的侵襲性是腫瘤相關(guān)信號(hào)通路、藥物治療、靶向治療、致癌/抑癌基因等腫瘤學(xué)研究的一個(gè)重要指標(biāo)。3.免疫細(xì)胞具有趨化性，例如粒細(xì)胞、巨噬細(xì)胞、單核細(xì)胞對(duì)CCL、CXCL類因子的趨化性，免疫細(xì)胞異常（如過度趨化）通常會(huì)引起一些炎癥類疾病如風(fēng)濕、關(guān)節(jié)炎、牛皮蘚、動(dòng)脈粥樣化等。具體操作以配合24孔板的8μMPET膜Millicell懸掛...

腫瘤細(xì)胞轉(zhuǎn)染實(shí)驗(yàn)小貼士

腫瘤細(xì)胞轉(zhuǎn)染目前已經(jīng)成為研究和控制真核細(xì)胞基因表達(dá)的重要手段。本文整理了一些關(guān)于轉(zhuǎn)染實(shí)驗(yàn)前的準(zhǔn)備工作及一些實(shí)驗(yàn)過程中的小貼士，希望這些信息能夠幫助各位科研君們做好轉(zhuǎn)染實(shí)驗(yàn)及提高實(shí)驗(yàn)效率。①從健康細(xì)胞開始Ⅰ轉(zhuǎn)染實(shí)驗(yàn)前，細(xì)胞解凍后傳代3–4次。這使得細(xì)胞從解凍過程中恢復(fù)過來，并恢復(fù)正常的生長(zhǎng)速度。Ⅱ僅使用活性90%的細(xì)胞——使用臺(tái)盼藍(lán)染色可輕松測(cè)定細(xì)胞活性。Ⅲ定期傳代細(xì)胞，切勿讓細(xì)胞長(zhǎng)到匯合狀態(tài)或過度生長(zhǎng)。如果讓細(xì)胞長(zhǎng)到匯合狀態(tài)，可能會(huì)改變細(xì)胞的生長(zhǎng)速度以及形態(tài)。a.請(qǐng)?jiān)趨R合率達(dá)...

原代細(xì)胞有絲分裂的實(shí)驗(yàn)方法

(一)原代細(xì)胞試驗(yàn)原理細(xì)胞有絲分裂指數(shù)(mitoticindex，MI)是指屬于分裂期的細(xì)胞占總細(xì)胞數(shù)的百分率．用于表示細(xì)胞增殖旺盛的程度，也可用于檢測(cè)藥物對(duì)細(xì)胞增殖能力的影響。用蓋玻片培養(yǎng)法培養(yǎng)細(xì)胞，做固定和染色后，鏡下觀察和計(jì)數(shù)1000個(gè)細(xì)胞中處于分裂期的細(xì)胞數(shù)并計(jì)算MI。(二)材料1．待檢材料(藥物)。2．細(xì)胞培養(yǎng)成層的貼壁細(xì)胞。3．試劑甲醇、3％吉姆薩染液。4．器材CO2培養(yǎng)箱、倒置顯微鏡、蓋玻片(2．2cm×2．2cm，需預(yù)先清洗和滅菌處理)、塑料培養(yǎng)皿(3．5cm...

細(xì)胞系器分配決定著肝細(xì)胞命運(yùn)

在細(xì)胞系一項(xiàng)新的研究中，來自美國(guó)洛克菲勒大學(xué)的研究人員發(fā)現(xiàn)這種關(guān)鍵性的決定取決于作為微小器官樣結(jié)構(gòu)的細(xì)胞器是否在分裂中的干細(xì)胞內(nèi)正確地分配?！盀榱俗屔眢w的組織正確地發(fā)育和自我維持，干細(xì)胞的自我更新和分化必需保持平衡。我們的實(shí)驗(yàn)提示著細(xì)胞器（在這項(xiàng)研究中，指的是過氧物酶體）的定位和分配在控制這種微妙平衡中發(fā)揮著一種意想不到的作用?！辈粚?duì)稱分裂作為皮膚的外部，表皮給身體提供一種保護(hù)性屏障，而干細(xì)胞位于它的內(nèi)部深處。在發(fā)育期間，干細(xì)胞發(fā)生不對(duì)稱分裂，產(chǎn)生兩個(gè)子細(xì)胞：一個(gè)子細(xì)胞保持自...

原代細(xì)胞融合實(shí)驗(yàn)

原代細(xì)胞實(shí)驗(yàn)原理細(xì)胞融合(Cellfusion)，即在自然條件下或用人工方法(生物的、物理的、化學(xué)的)使兩個(gè)或兩個(gè)以上的細(xì)胞合并形成一個(gè)細(xì)胞的過程。人工誘導(dǎo)的細(xì)胞融合，在六十年代作為一門新興技術(shù)而發(fā)展起來。由于它不僅能產(chǎn)生同種細(xì)胞融合，也能產(chǎn)生種間細(xì)胞的融合，因此細(xì)胞融合技術(shù)目前被廣泛應(yīng)用于細(xì)胞生物學(xué)和醫(yī)學(xué)研究的各個(gè)領(lǐng)域。細(xì)胞融合的誘導(dǎo)物種類很多．常用的主要有滅活的仙臺(tái)病毒(Sendaivirus)，聚乙二醇(Polyethyleneglycol，PEG)和電脈沖。目前應(yīng)用z...

解釋間質(zhì)腫瘤細(xì)胞治療成骨不全癥

“之前關(guān)于腫瘤細(xì)胞移植治療成骨不全癥的研究存在許多不確定的結(jié)果，這些研究也未能提供證據(jù)證明骨髓間質(zhì)干細(xì)胞能直接分化成成骨細(xì)胞和骨細(xì)胞。我們小組的研究指出了骨髓間質(zhì)干細(xì)胞通過自身分化為成骨細(xì)胞和骨細(xì)胞，合成I型膠原以治療成骨不全癥?！贝喙遣?，醫(yī)學(xué)名稱為成骨不全癥（osteogenesisimperfecta），是一種少見的先天遺傳性骨骼發(fā)育障礙性疾病，主要表型為I型膠原合成障礙，發(fā)病率約為萬分之一，*大約有500萬病人，目前對(duì)這種疾病主要采取預(yù)防骨折等對(duì)癥治療方法，并無有效的治...

CRISPR-Cas9聯(lián)手腫瘤細(xì)胞培養(yǎng)

腫瘤細(xì)胞用RNA指導(dǎo)的CRISPR-Cas9系統(tǒng)能夠的切割掉特定位置的DNA，避免了傳統(tǒng)RNAi技術(shù)中出現(xiàn)的不能*敲除既定基因或者脫靶效應(yīng)問題。利用該項(xiàng)技術(shù)，不僅能夠?qū)崿F(xiàn)*敲除細(xì)胞既定基因的目的，還能夠隨意改變細(xì)胞核苷酸的序列，甚至能夠編輯原代鼠源細(xì)胞的基因組。因此，利用CRISPR-Cas9系統(tǒng)靶向敲除原代人源細(xì)胞特定基因，為人類多種疾病中某個(gè)或者多個(gè)基因功能的研究，進(jìn)一步確定致病的分子機(jī)制提供了一個(gè)十分強(qiáng)大的研究途徑。然而，由于原代上皮細(xì)胞自身具有較低的轉(zhuǎn)染效率，而用傳統(tǒng)...

原代細(xì)胞 凍存及復(fù)蘇

為了保存原代細(xì)胞，特別是不易獲得的突變型細(xì)胞或細(xì)胞株，要將細(xì)胞凍存。凍存的溫度一般用液氮的溫度—－196℃，將細(xì)胞收集至凍存管中加入含保護(hù)劑（一般為二甲亞砜或甘油）的培養(yǎng)基，以一定的冷卻速度凍存，zui終保存于液氮中。在極低的溫度下，細(xì)胞保存的時(shí)間幾乎是無限的。復(fù)蘇一般采用快融方法，即從液氮中取出凍存管后，立即放入37℃水中，使之在一分鐘內(nèi)迅速融解。然后將細(xì)胞轉(zhuǎn)入培養(yǎng)器皿中進(jìn)行培養(yǎng)。凍存過程中保護(hù)劑的選用、細(xì)胞密度、降溫速度及復(fù)蘇時(shí)溫度、融化速度等都對(duì)細(xì)胞活力有影響。將取得的...