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重組原代細胞因子的狀態

重組原代細胞因子要求：1.真實性：重組蛋白產品一致經過N末端氨基酸序列分析；必要時應用SDS-PAGE,RP-HPLC和質譜(MS)檢測其真實性。2.純度：應用SDS-PAGE和RP-HPLC方法分析產品純度。3.生物活性：進行相應的體外(invitro)或體內(invivo)活性檢測。4.蛋白含量：通過紫外光譜分析，SDS-PAGE電泳檢測；必要時應用HPLC定量標準蛋白溶液。5.內毒素：kineticLAL法檢測內毒素。6.微生物：重組蛋白在裝瓶之前都經過濾除菌處理。重組...

分享活腫瘤細胞表面受體配體結合檢測的新技術

Tag-lite是SNAP-Tag與HTRF技術相結合，用來進行活腫瘤細胞表面受體分析的一種技術。SNAP和CLIP是小的融合標簽蛋白，可特異地與底物通過芐甲基不可逆共價結合，其底物分別為芐甲基鳥嘌呤（BG）和芐甲基胞嘧啶（BC）。由于底物可與各種染料形成衍生物，這樣，通過共價反應，染料就標記到SANP或CLIP上了。SNAP或CLIP可以非常容易地融合到蛋白質的N端或C端，所以我們可以構建SNAP或CLIP與目標蛋白的表達載體。質粒轉染、融合蛋白表達后，加入標記了熒光染料的...

實驗鼠有助攻克細胞株療法難題

研究人員介紹，人類胚胎細胞株可分化成人體內的各種細胞及組織，所以對治療人類重大疾病有巨大潛力。但目前干細胞療法發展面臨的一個主要瓶頸就是移植后的免疫排斥。新研究的成功關鍵在于開發出一種“人源化”實驗鼠。徐洋表示，雖然小鼠和人的免疫系統有很多相似處，但它們也有很多不同的地方，所以小鼠模型中獲得的關于防止免疫排斥的策略在人的臨床試驗中大多以失敗告終。為解決這個問題，他們將人胚胸腺及胚肝中的造血干細胞移植到免疫缺陷小鼠體內，培育出“人源化”實驗鼠，它們會有效排斥異體人類胚胎干細胞分...

判斷原代細胞活性是否正確工作的原理

原代細胞活性是判斷體外培養細胞在某些條件下是否能正常生長的重要指標,如藥物處理、放射性或紫外線照射、培養條件變化等。目前常用的方法有很多,如有臺盼藍染色法、克隆(集落)形成法、H放射性同位素摻入法、MTT法等。本文總結了一些常用的細胞活性檢測方法的原理、特點，并對比了各自的優缺點。一、染色計數法1.化學染色法染色計數法是細胞培養中檢查細胞死活zui常用的方法，直接利用死細胞和活細胞對染料的不同親和力，檢查細胞活性，能在光學顯微鏡下觀察到染色結果。可分為兩類：死細胞著色法和活細...

詳解原代細胞凍存的步驟

（1）選擇處于對數生長期的原代細胞，在凍存前一天換液。將多個培養瓶中的細胞培養液去掉，用0.25%胰蛋白酶消化。適時去掉胰蛋白酶，加入少量新培養液。用吸管吸取培養液反復吹打瓶壁上的細胞，使其成為均勻分散的細胞懸液。懸浮細胞則不要消化處理。然后將細胞收集于離心管中離心(1000r/min，10分鐘)。（2）去上清液，加入含20%小牛血清的*培養基，于4℃預冷15分鐘后，逐滴加入已無菌的DMSO或甘油，用吸管輕輕吹打使細胞均勻，細胞濃度為5×106～1×107/mL之間。（凍存培...

胰酶不能去除對原代細胞影響的原因

原代細胞消化時，如果消化液中只有胰酶，不含EDTA，不去除是沒有問題的。如果消化液中含有胰酶和EDTA，去除。EDTA是一種化學螯合劑，主要作用在于能螯合Ca、Mg離子，使細胞分離。但EDTA不能被血清中和，消化后要*清洗去除，否則細胞易脫壁。胰酶胰酶和EDTA聯合使用可提高消化效率，所以常二者合用。胰酶的保存胰酶可在-20℃下保存一年。隨著時間延長，胰酶的消化能力減弱。胰酶可分裝凍存，在使用前從-20℃冰箱取出。盡量避免在4℃長期保存。商品化胰酶溶液需要用干冰運輸，在運輸過...

腫瘤細胞在藥物心臟毒性篩選中的應用

腫瘤細胞和誘導型人多能干細胞誘導分化的心肌細胞相似,具有相同的形態結構,且隨著培養時間的推移,功能性K+、Na+、Ca2+通道密度逐漸增加、心肌特異性基因ANF、α-MHC、MLC-2a的表達量增加,具有相似的動作電位時程和收縮性等特點,相當于幼稚型心肌細胞。將它們應用于已知作用藥物的心臟毒性篩選,檢測心肌細胞離子通道、動作電位、心臟損傷標志物、收縮功能的變化,獲得與臨床相似的結果。因此,建立人胚胎干細胞和誘導型人多能干細胞誘導分化心肌細胞的體外評價模型,大大減少了藥物的時間...

5-羥色胺可調控造血腫瘤細胞移植

腫瘤細胞是一群能自我更新并分化為各種成熟血細胞的多能干細胞。基于其重建血液系統的能力，造血干細胞移植已成功用于治療白血病等惡性血液疾病。如何體外誘導和擴增足夠數量且有功能的HSPCs，是臨床上惡性血液疾病治療的瓶頸，也是基礎科學研究的難點和熱點之一。其目前尚未成功的根本原因在于人們對HSPCs產生和擴增的調控機制認識仍不全面。因此，應用模式動物深入和系統地研究體內HSPCs產生和擴增過程及其調控機制，將對體外誘導并擴增有功能的HSPCs具有十分重要的指導意義。中國科學院動物研...